一株家养野猪源猪圆环病毒2型的分离及鉴定.doc

一株家养野猪源猪圆环病毒2型的分离与鉴定 王海燕 高 崧* 刘秀梵 (扬州大学 农业部畜禽传染病学重点开放实验室 扬州 225009) 摘 要: 应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段, 在Dulac细胞中进行分离和培养, 扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示, 扩增产物与家猪源参考毒株的序列同源性均在98%以上, 该病毒与家猪源病毒差异不大。 关键词: 家养野猪, 猪圆环病毒2 型, 分离, 鉴定 Isolation and Identification of Porcine Circovirus Type 2 Virus from a Domesticated Wild Boar WANG Hai-Yan GAO Song* LIU Xiu-Fan (Key Laboratory of Animal Infectious Diseases of Ministry of Agriculture, Yangzhou University, Yangzhou 225009) Abstract: The nucleic acid fragment of porcine circovirus type 2(PCV2)was amplified using PCR from the tissues of a domesticated wild boar with suspected postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). The sample were then inoculated into the Dulac cells and passaged for 8 generation. The 4 nucleic acid fragments covered the complete genome for PCV2 were obtained by over-lapping PCR and sent to sequence. The sequence of genome was compared with other 9 strains originated from piglets in the same area. The result showed that these strains were in high homology. Keywords: Domesticated wild boar, Porcine circovirus type 2, Isolation, Identification猪圆环病毒2 型( porcine circovirus type 2, PCV2)能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(ostwea- ning multisystemic wasting syndrome, PMWS)、猪皮炎与肾病综合征、繁殖障碍等疾病[1]。PMWS是一种以断乳仔猪渐进性消瘦、呼吸困难、腹泻、贫血、明显的淋巴组织病变为主要特征的疾病[12]。自1991 年在加拿大首次发现PMWS 以来欧美多个国家和日本相继报道了PMWS 的发生和流行[3?6], 我国首次分离到该病毒是在2001年[7]。随后国内学者们证实该病毒我国猪场广泛存在并造成了巨大经济损失[8?10]。家猪和野猪被认为是PCV2的宿主[1], 野猪感染发病的报道很少[1112]。近年来我国多个地区开始饲养野猪或杂交野猪随着野猪进入饲养环境中家猪接触, 其生态和环境发生了变化, 与家猪携带的病原体接触频率高, 一些传染病开始和流行。本研究对从疑为PMWS的野猪病料中分离到的一株PCV2进行了鉴定。 1材料与方法 1.1病料和生物材料 来自江苏某猪场病猪死亡前主要表现体温升高、消瘦、呼吸困难等临床症状剖检取病变的淋巴结、肺和脾脏组织置于?70(超低温冰箱中保存备用。Dulac细胞(无PCV1污染) 由本室保存PCV1 参考毒株由本室分离保存; PCV2标准毒株由南京农业大学陈溥言教授惠赠。PCV2分离株ChangZhou0511DaFeng0609、GaoYou0707、HuaiAn0609、SuZhou0511、Taizhou0512、TianChang0603、YangZhou0608和YangZhou0705均由本室分离保存。 1.2培养基和试剂 DMEM为美国GIBCO公司产品; NCS购自Hyclone 公司; Taq DNA 聚合酶(含10×Buffer)、dNTP、100 bp DNA Marker购自大连TaKaRa生物工程有限公司; 蛋白酶K、胰酶购自上海