四逆汤组方配伍减毒实验研究.docxVIP

四逆汤组方配伍减毒实验研究张广平1 ,朱晓光1 ,孟贺 1 ,张思玉 1 ,杨海润 1 ,叶祖光21.中药复方新药开发国家工程研究中心,北京 100075；2.中国中医科学院,北京 100700摘要：目的针对四逆汤组方中所含的有毒中药附子,从毒理学角度研究四逆汤组方配伍的合理性。方法通过平行比较附子、附子配伍甘草、附子配伍干姜和四逆汤全方水煎液小鼠急性毒性、大鼠心脏毒性和毒性成分,测定小鼠急性毒性的半数致死剂量(LD 50 )、大鼠心脏毒性半数中毒剂量(TD 50 )和水煎液液中乌头碱类生物碱含量,从急性毒性、毒性靶器官和毒性成分 3 个方面研究四逆汤组方中不同配伍对附子毒性的影响。结果四逆汤组方中附子配伍甘草急性毒性的 LD 50 和心脏毒性的 TD 50 高于单用附子与四逆汤全方。而附子配伍干姜对附子的急性毒性的 LD 50 和心脏毒性的 TD 50 影响不明显。附子配伍甘草水煎液中主要毒性成分双酯型生物碱含量低于附子配伍干姜。结论四逆汤组方配伍药物中甘草对附子毒性具有减毒作用。关键词：四逆汤；配伍减毒；附子；动物模型四逆汤是回阳救逆的代表方剂,由其加减化裁的一系列类方在临床大量应用[1-2] 。四逆汤由附子、干姜、甘草 3 味药物组成,其中附子为有毒中药。本实验通过拆方分析,比较研究附子与甘草或干姜的配伍对于附子毒性以及附子中的毒性成分的影响,从毒理学角度探讨四逆汤处方配伍的合理性。1 实验材料1.1 药物附子(黑顺片)：产地四川,批号 110106061,经同仁堂研究院迟玉明研究员鉴定为毛茛科植物乌头 Aconitumcarmichaeli Debx.的子根的加工品；甘草：产地甘肃,批号110107051,经同仁堂研究院迟玉明研究员鉴定为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根茎；干姜：产地四川经同仁堂研究院迟玉明研究员鉴定为姜科·30· Chinese Journal of Information on TCM Aug.2013 Vol.20 No.8植物姜 Zingiber officinale Rosc.的干燥根茎。均购自北京仁卫饮片厂。1.2 对照品乌头碱(含量测定用,批号 110720-200410)、次乌头碱(含量测定用,批号 110798-200805)、新乌头碱(含量测定用,批号110799-200404)、苯甲酰乌头原碱(含量测定用,批号 111794-200901)、苯甲酰次乌头原碱(含量测定用,批号111796-200901)、苯甲酰新乌头原碱(含量测定用,批号 111795-200901),以上对照品均购于中国药品生物制品检定所。乙腈及四氢呋喃为色谱纯,其余试剂为分析纯；液相色谱用水为超纯水(自制,0.45 μm滤膜滤过)。1.3 受试物的制备受试药物分为附子单煎液、附子＋甘草配伍煎液、附子＋干姜配伍煎液、四逆汤全方煎液 4 种样品溶液。附子单煎液：加 6 倍量水浸泡 45 min,水沸腾后第 1 次煎煮 30 min,第 2 次加5 倍量沸水煎煮 30 min。4 层纱布过滤,合并 2 次煎液,将滤液水浴(70 ℃)浓缩至所需浓度,置冰箱冷藏保存备用。四逆汤全方及其组方(附子＋甘草、附子＋干姜)配伍比例依据四逆汤处方配伍比例进行配伍。四逆汤：附子＋甘草＋干姜＝5∶2∶3；附子＋炙甘草组方：附子∶甘草＝5∶2；附子＋干姜组方：附子∶干姜＝5∶3。药物制备方法同附子单煎液。1.4 仪器6 道生理记录仪(美国 BIOPAC 公司生产),Agilent 1200高效液相色谱仪,AdventurerTM AR1140 电子天平(0.0001 g),METTLER TOLEDO AB135-S 电子天平(0.01 mg)。1.5 动物ICR 小鼠,SPF 级,18～22 g；SD 大鼠,SPF 级,200～250 g。实验动物购自北京大学医学部,动物合格证号： SCXK(京)2006-0008,饲养条件：动物房实验设施为屏障系统,温度 20～24 ℃,相对湿度为 40%～70%,人工光照,12 h 明暗周期。动物饲料为大、小鼠标准颗粒饲料。2 实验方法2.1 急性毒性实验急性毒性实验参考新药研发的安全性评价指导原则[3] 进行,具体如下：在进行正式实验前先进行附子的小鼠急性毒性预实验,得到导致小鼠全部死亡的剂量和动物全部存活剂量。以附子预实验结果为依据,附子实验剂量以高于预实验动物全部致死剂量和低于动物全部存活剂量为实验剂量范围的上限和下限剂量,以组间距为 0.8,设置附子不同剂量组。附子配伍组中的附子剂量以所含的附子原药材量计,剂量设置完全等同于单用附子组的剂量。动物购入后,先适应性喂养 3 d。实验当日,按体质量随机分组,每组 10 只。