分子生物与分子生物化学.PDF

2015/5/12 一、PCR仪 分子生物及分子生物化学 PCR是一种模拟天然DNA复制过程，在体外 扩增特异性DNA片段的新技术，又称为无细胞分 技 术 及 仪 器 子克隆 。其基本原理是以待扩增的两条DNA链作 为模板，由一对人工合成的寡核苷酸引物介导， 以dNTP为底物，通过DNA多聚酶促反应，于体外 快速扩增特异性DNA序列。 2015/5/12 实验技术中心三部 2 （一）基本概念 1.DNA的组成和结构 多数样品经1～3小时(20～30周期)后， 自然界中的DNA是以双螺旋结构形式存在的。其 基本结构单位是脱氧核糖核苷酸。脱氧核苷酸由碱基、 DNA片段可扩增百万倍以上。然后采用核酸分 磷酸和脱氧核糖组成。其中碱基有四种：腺嘌呤 （A ）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）和胸腺嘧啶 子检测手段，从极微量的样品中获得足够DNA （T）。两条互补的多聚脱氧核苷酸单链，在氢键的 -5 作用下配对，形成双螺旋结构的双链。碱基的配对是 供分析研究之用，检出灵敏度可为10 pg。 固定的，即A-T，G-C。A和T间形成两个氢键，G和 C间形成三个氢键，这种氢键连接是相当稳定的。 2015/5/12 实验技术中心三部 3 2015/5/12 实验技术中心三部 4 2.DNA的变性和复性 DNA双螺旋结构的生物学功能主要在于复制和 变性和复性在一定条件下是完全可逆的。DNA双 转录。通过加热可以使DNA双螺旋的氢键断裂，双 链解离一半的温度称为解链温度T 。不同的DNA，T 不 链解离，形成单链DNA，此即为DNA高温热变性。然 m m 同，T 范围一般在85～97℃。当DNA含40% G-C时，T 而在解除变性的条件之后（如降低温度），变性的 m m 为87℃；当DNA含60% G-C时，T 为95℃。 单链又可以重新结合起来，形成双链，其原有的物