新型地四环素诱导表达系统.PDFVIP

新型的四环素诱导表达系统 Clontech 公司一度曾是蛋白表达领域的领头羊，不过这几年，它沉寂了很多。近日，Clontech 宣 布推出新型的四环素诱导表达系统，向世人证明它在此领域仍然是相当强的。 Clontech 推出的四环素诱导表达系统名为 Tet-Expression Inducible Expression System ，比 之前广泛使用的Tet-On/Tet-Off 表达系统更快、更 简单。与Tet-On/Tet-Off 不同，Tet-Express 系统 只需要单个载体和Tet-Express 转导蛋白。诱导表 达时，只需在细胞培养基中加入几微升 Tet-Express ，即可让所有细胞类型处于四环素控 Tet-Express 的出现替代了表达反式激活因子 制的转录之下。 的载体，也就无需对细胞系进行多轮的克隆筛选， 这特别适合那些不能进行多轮筛选的细胞，如原代 什么是Tet-Express ？ 细胞。经过Clontech 验证，Tet-Express 在多种细 Tet-Express 是一种 Tet-Off 高级转录激活因 胞系中都很有效，如293T、MCF7 和HepG2。 子蛋白，它经过修饰和优化，能进行自我转导，也 极低的本底表达 就是说，它能够通过蛋白转导通路自行穿过细胞膜 进入细胞核。在没有四环素的情况下，Tet-Express Tet-Express 和 Tet-On 3G 系统中都包含了 结合PTRE3G 启动子，并激活表达。这与Clontech pTRE3G 载体。此载体的可诱导启动子（PTRE3G） 的Tet-On 3G 系统有些类似，但省了一个表达四 确保了极低的本底表达以及诱导后极高的表达。它 环素反式激活因子的载体，整个实验也就简单了很 在 CMV 启动子的上游包含了7 个相同的tetO 重 多。 复片段，也就是反式激活因子的结合位点，我们称 之为四环素反应元件（TRE ）。 基因表达的快速诱导 由于 PTRE3G 缺乏内源转录因子的结合位 首先，将您的目的基因克隆到TRE 启动子之 点，且缺乏反式激活蛋白时CMV 启动子失活，所 下。若需要表达目的蛋白，立即加入Tet-Express， 以PTRE3G 的本底表达是目前包含TRE 的启动子 基因表达会快速上升，两小时后达到最大值的80% 中最低的。实验证明，Western 分析无法检测到本 以上。若暂时不想表达目的蛋白，那就不加 底表达。然而，在反式激活因子存在时，表达可被 Tet-Express ，就这么简单。下图显示了用 诱导到一个非常高的水平。 Tet-Express 处理或未处理的HeLa 细胞中萤光素 酶的表达量。 不同的载体选择 Tet-Express 诱导表达系统有四种不同的载体 形式，分别为pTRE3G （普通版）、pTRE3G-IRES 第 31 页，共 34 页 下一页