2012年酵母蔗糖酶的提取分离纯化及其蛋白质浓度和酶活力测定126.pptxVIP

实验十 酵母蔗糖酶的提取、分离纯化及其 蛋白质浓度和酶活力测定; 蔗糖酶催化底物蔗糖分解成葡萄糖和果糖 蔗糖酶在酵母细胞中存在着两种形式 : 存在于细胞膜外细胞壁中的高度糖基化的外蔗糖酶，其活 力占蔗糖酶活力的大部分，是含有50％（质量分数）糖成 分的糖蛋白，该酶是蔗糖酶的主要形式 存在于细胞膜内侧细胞质中的低糖基化的内蔗糖酶。 ;; 酶是生物体内具有催化活性的物质，可据酶蛋白的结构和性质来选择分离提纯方法和含量测定。 酶的分离提纯是为了提高纯度（或比活力）及收率；依据其性质（分子大小、溶解度、电荷、吸附等）进行分离; 同时用测定酶活力的方法了解酶的去向、衡量酶提纯的程度和得率。;本实验由四个分实验组成：;分实验一：蔗糖酶的提取与初步纯化;二、实验原理 细胞破碎的方法;蛋白质的沉淀 蛋白质???溶液中以固体状态析出的现象 　作用机制主要是破坏了蛋白质水化膜或蛋白质所带的电荷 主要沉淀方法： 　盐沉淀蛋白质——盐析 重金属盐沉淀蛋白质 某些酸类沉淀蛋白质 有机溶剂沉淀蛋白质 ; 乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂可破坏蛋白质的水化层，使蛋白质的溶解度下降；另一方面有机溶剂能降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子上不同电荷的引力，降低其溶解度，因此使之发生沉淀反应。