第四章 酶生物传感器.ppt

(c)单束光纤，生物敏感膜与光纤为一体 生物敏感膜 (a)双束光纤 (b) 单束光纤， 生物敏感膜在端部 光纤生物传感器信号转换器的三种结构 光纤光学生物传感系统 1.光纤生物传感器的特点 抗干扰能力强，不受电磁场的干扰； 不用参比电极，可以微型化； 实现远距离的遥测； 响应速度快，灵敏度高。 2. 光纤酶传感器的工作原理 待测物质从样品溶液中扩散到生物敏感膜时，在固定化酶的催化下生成一种待检测的物质； 当底物扩散速度与催化产物生成速度达成平衡时，即可得到一个稳定的光信号，依据光信号的大小与底物浓度的函数关系，得到底物的浓度，一般情况下光信号大小与底物浓度成正比。 3. 光纤酶传感器的分类 按照换能器能量转换方式的不同，分为化学发光型、光吸收型、荧光猝灭型、指示剂型和生物发光型。 （1）化学发光型 某些化学反应伴随光子的释放，释放的光子即化学发光的强度与待测物的浓度呈线性关系。 但有些生化反应不能释放光学信号，需要引入中间物，使其转变成能进行光检测的信号。 鲁米诺（luminol）（3-氨基-邻苯甲酰肼），又称发光氨、光敏灵。在碱性条件下能被许多氧化剂（例如H2O2，ClO-等）氧化而发出蓝色的光，是研究最早、最多、应用最广泛的发光试剂。 谷氨酰胺 谷氨酸+NH3 谷氨酸+O2+H2O α酮戊二酸+H2O2+ NH3 鲁米诺+ H2O2 氨基邻苯二甲酸+N2+hγ 谷氨酰胺酶 谷氨酸氧化酶 鲁米诺+ H2O2 氨基邻苯二甲酸+N2+hγ GOD氧化葡萄糖，生成的过氧化氢启动鲁米诺电化学发光，并通过光纤传感器检测发光信号。酶促反应和发光反应同时发生，因此传感器响应非常快。 鲁米诺+ H2O2 氨基邻苯二甲酸+N2+hγ （2）光吸收型 如果被测物A不具有光学活性，经酶催化后产生具有特征光吸收的产物P，或是被测物A具有特征光吸收特性而产物P不具备这种性质，便能通过反应前后吸光值的变化来测定底物。 * 对硝基苯酚在404nm波长有最大吸收峰。 （3）荧光猝灭型 由于荧光物质分子与溶剂分子相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭。 使荧光强度下降的物质称为荧光猝灭剂。 麦芽糖光纤传感器： 大肠杆菌细胞膜上分离出麦芽糖结合蛋白，这种蛋白被激发光激发时产生荧光，但与麦芽糖结合后，荧光活性猝灭。 （4）指示剂型 在pH光极含有一种荧光染料—1-羟基-3,6,8-三硫磷酸(HPTS)。在450nm波长的光辐射下，HPTS受激发出515nm的荧光。 HPTS的荧光强度与溶液的pH有关，生物反应引起微环境的pH改变，从而引起HPTS 的荧光强度的改变，达到检测的目的。 （5）生物发光型 是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。由细胞合成的化学物质，在一种特殊酶的作用下，使化学能转化为光能。 生物发光主要有ATP依赖型和还原型黄素单核苷酸(FMNH2)依赖型两类。 * 含有荧光素、荧光素酶，与ATP及氧一起反应，氧与荧光素结合时发生电子转移，同时发生能量的变化释放出荧光光子而发光。 萤火虫 萤火虫现象 ATP依赖型 还原型黄素单核苷酸（FMNH2）依赖型 细菌发光 底物在催化循环中会形成还原型核黄素磷酸盐和醛化合物，当遇到荧光素酶和氧时，就会形成一种激发的络合物，发出480-490nm波长的光。 思考题： 1.简述葡萄糖传感器和尿素传感器的构成及测量原理 。（选取1种信号转换器即可） * 电位型酶电极所用的基础电极是对 某种离子有选择性或对气体有选择性的电极 离子选择性电极 气敏电极 * 1773年，伊莱尔·罗埃尔（Hilaire Rouelle）发现尿素。