微卫星DNA在6个山羊群体中的多态性检测.pdfVIP

基刍动拯盆壬遗佳撞苤塑直蓬!-263 微卫星DNA在6个山羊群体中的多态性检测 赵艳红1 马月辉2张立岭1 (1．内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特，010018) (2．中国农业科学院畜牧研究所，北京，100094) BMl225)在6个山羊群体(二狼山、阿拉善、乌珠穆沁、阿尔巴斯、辽宁绒山羊，陕南白山羊)中的多态性检 测情况。姑果表明：这五个微卫星位点分别检测到3—12个等位基因不等，片段大小在120—294之间。从 而可以看出它们的多态性比较丰富，可初步确定这五个微卫星位点可作为山羊遗传多样性分析。 关键词微卫星DNA；山羊；多态性 泛分布着许多简单的重复DNA片段，它们是由核心序列与两侧的侧翼序列构成，一般每个重复单位仅 DNA(simplesequeneerepeat，SSR)。关于微卫星产生机理，主要有四种假说：一是滑动学说，认为在微卫 星位点上等位基因长度变异的产生和高变是因为在重复序列复制过程中DNA聚合酶的滑动以及酶对 微卫星标记是目前发展最快的一种分子标记，它具有以下特性：1)保守性：微卫星座位在哺乳动物 物种间，特别是一些紧密相关的物种如牛与羊、马属动物以及鸡与火鸡间具有一定程度的保守性。从牛 的基因组中选出的用于扩增微卫星的PCR引物56％可用于羊，其中42％的扩增产物表现出多态性。而 等显性遗传，即能够区分纯和体与杂和体，Thomas等”1利用三个品系鼠染色体上的419个微卫星位点， 分析了它们之间的可变等位基因数目，证明了微卫星的共显性遗传。3)微卫星标记杂合程度高：由于 微卫星每个座位的等位基因数目相当多，有些座位甚至多达16个，因而由微卫星多态得出的杂合度高， 多态性信息含量(PIC)大。另外，与其它标记技术相比，微卫星检测技术又具有以下优点：1)样品的微 量化：需要微量的模板DNA就可以检测；2)样品来源方便可靠：可以利用不同的样品来源。包括血样、毛 发、精液、组织等，且质量要求不高；3)检测容易标准化和自动化，重复性好，结果可靠；4)检测快速、高 效：可以在实验室进行大批量操作；5)准确性高：利用12个微卫星位点．父权否定率可达99．9％以上； 6)可长期使用、保存，降低检测成本。因此，微卫星在研究物种的进化、起源及分类上将会有很大意义”3。 近年来，随着国内外学者对其结构、遗传特性、发生机理等研究的不断深入，它在构建遗传连锁图谱、评估 遗传多样性、绘制系统发生树、疾病诊断及亲子鉴定等方面愈来愈显示出巨大的优势，并已在人和动植物 的遗传研究中得到广泛应用”’。为此本研究采用10个微卫星位点，检测中国4个品种6个群体山羊的多 态性。为揭示其遗传结构、遗传背景及开展下一步品种资源保存、遗传育种工作提供参考依据。 1材料与方法 1．1实验材料 采自中国西部陕西省、青海省和内蒙古的6个山羊品种群体，共计240只，其中阿尔巴斯绒山羊采 2“-I圭国墅搀遣僮童弛亟窒进最 自内蒙古鄂托克旗阿白羊场(“只)、二狼山绒山羊采自内蒙古巴盟同合太羊场(44只)、乌珠穆沁绒山 羊采自内蒙古东鸟旗改良站种羊场(44只)、阿拉善自绒山羊采自内蒙古阿盟改良站种羊场(44只)、辽 宁绒山羊采自青海省荚德尔种羊场(20只)、陕南白山羊采自陕西宁强县(44只)。全部样品均为随机 取样。 1．2实验方法 1 2．1 DNA的提取 采用常规酚抽提法(详见《分子克隆实验指南》第二版)”。。 引物全部由北京赛百盛公司合成。 1．2．3PCR扩增 3反应条件，其中各组分的终浓度分别为dNTPs0．2mM、 本实验采用12，山反应体系，参照Crawford[5 增产物于0．8％琼脂糖凝胶电泳检测。 l，2．4聚丙稀酰胺凝胶电泳 利用聚丙稀酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物，电泳结果用柯达凝胶成像系统进行照像、保存并分析。 2结果与讨论 6个群体中共检测到59个等位基因，BMS6404座位有28个等位基因。由于微卫星标记的自发突变率 比较高，无规律可寻，因此在某些种群中突变的发生率很高，呈高度多态，而在某些种群中则可能很低， 为低度多态或单态”]，如Srcrsp23在阿拉善绒山羊为中度多态而在辽宁绒山羊为单态。对于亲缘关系 较远的群体这种现象表现的更为突出。刘小林等用淀粉凝胶电泳法测定了33个阿拉善绒山羊血液蛋