小分子抗体芯片及其在同步多元分析中的应用.pdfVIP

V01．30 第30卷专辑 南昌大学学报(理科版) Suppl of 2006年9月 JournalNanchang Science) Sept．2006 University(Natural 文章编号：1006—0464(2006)专辑一0991—02 小分子抗体芯片及其在同步多元分析中的应用 宋世平，樊春海 (中国科学院上海应用物理研究所上海201800) 中图分类号：0657 文献标识码：A 随着微型化分析技术的发展，应用蛋白质芯片 对血液样品和其他生物样品进行同步多元分析在生 品2种，将各标准品及质控品加至免疫微阵列芯片 命科学领域已经变得越来越重要，尤其是在肿瘤学、 上。芯片置于饱和湿度及室温环境下温育，洗涤后 血液学和药物筛选等医学领域以及蛋白质组学等其 6种肿瘤标志抗原的单克隆抗体(与捕获探 加15ttL 他生物学研究领域¨。1。作为蛋白质芯片之一的抗 针F(ab9：配对)的混合物，温育3h；洗涤后加15 体微阵列芯片因其高通量、高灵敏和高特异的特点 斗L羊抗鼠IgG抗体(Fc区特异)一生物素联接物， 已逐渐成为蛋白质分析的理想选择，抗体也被认为 温育2h；洗涤后加15以异硫氰酸荧光素(FITC) 是最有前途的生物芯片捕获探针。抗体微阵列芯片 一亲合素联接物，温育Ih。操作程序如图I所示。 是一种特殊的蛋白质芯片，芯片上固定的蛋白质是 芯片经洗涤干燥后放置在荧光显微镜下成像，并通 特异性的抗体，通过与其配体一抗原的特异性免疫 过软件对成像结果进行数据处理。 反应即可实现基于芯片的免疫检测。随着抗体微阵 2结果与讨论 列芯片研究的不断深入，无论在基础研究还是临床 研究领域，越来越多的生物化学家投入劐了这一领 本研究以一种小分子抗体一一单克隆抗体片断 域的研究之中p-4]。但抗体以整分子的形式作为捕 (Fab9：为捕获探针制备了蛋白质微阵列芯片，同时 获探针时，容易造成非特异性增高、信噪比下降，进 引入亲合素一生物素检测体系，建立了一种同步多 而降低灵敏度和选择性，有时还会影响到免疫反应 元微型化分析系统，并初步应用于肿瘤标志抗原的 构型的整体设计，所以有必要对抗体分子进行改造， 检测。结果表明(图2)，抗体片断微阵列芯片具有 去除非特异部分，使其成为特异性更强的捕获探针。 良好的捕获性能，能够同步检测六种肿瘤标志抗原， 本实验室应用单克隆抗体酶切后所得到的小分子抗 并得到了较常规检测范围更宽的标准曲线(0—640 体——可变区片断(Fab’)：建立了一种高通量、高特斗g／L)，具备较高的灵敏度(7斗g／L)和特异性。 异的抗体片断微阵列芯片分析系统，同时引入亲合 另外，应用本芯片系统对100多例血液样品进行了 素一生物素检测放大体系进一步提高了灵敏度，并 分析，并与整分子抗体芯片和常规方法进行了比较， 初步应用于六种特异性肿瘤标志抗原的检测，今就 证实其较前者具有明显的优越性，并与后者具有良 本实验进展做一简要报道。 1 实 验 将6种单克隆抗体分别用胃蛋白酶消化，得到 其F(ab’：和小片断，用超滤分离器分离纯化得到F ，(ab，：片断．将6种F(ab，：片断分别制成探针固 化溶液(200—240rag／L)，按照设定的模式(