压电免疫传感器检测人血清白蛋白抗体活性.pdfVIP

压电免疫传感器检测人血清白蛋白抗体活性 王桦吴朝阳曹祉祥沈国励+俞汝勤 (湖南大学化学计量学与化学生物传感技术教育部重点实验室，化学化工学院，长沙 抗体的发现和应用．对临床医学的诊断、治疗和预防起到了很大的推动作用： 高效价和高特异的抗体的制备需要一种合适的检测抗体活性的方法：但是目前常用 的方法…均需先将待测抗体纯化后才能检测，操作繁琐费时。本文研制的压电免疫 传感器基于正丁胺等离子体聚合膜，采用聚电解质吸附固定活性物质，用于非纯化 的条件下实时检测人血清白蛋白抗体活性，与一般表面等离子体共振法(SPR)口l 比较，不仅具有准确、快速、实时、免标记和非纯化等特点，而且较之具有仪器体 积小、价格便宜、再生简便等优点，可广泛应用于临床实验室抗体(抗原)的检 测，也是一种鉴定抗体类型、筛选杂交瘤和筛选特效性药物的实用工具。 1．实验部分 1-l仪器与试剂 165型高分辨记数 电容耦合式等离子体淀积设备(电子部第48研究所)：CN3 IvIHz，AT切型石英晶振(北京无线电器材厂)。人 器(石家庄无线电四厂)：9 血清纯白蛋白(HSA，卫生部上海生物制品研究所)；人血清白蛋白抗体(抗 HSA．浙江玉环生物试剂厂)：聚苯磺酸钠(PSS，Sigma公司)：甘氨酸(上海康 达氨基酸厂)；牛血清白蛋白(BSA，上海生物化学试剂有限公司)；其它试剂为 分析纯，所用水为二次蒸馏水。 ， 1．2检测方法 按照文献I”，在石英晶振上沉积正丁胺等离子体聚合膜后．晶振的一面用O型 pH2．O)溶液 橡胶圈和塑料片封闭，使成单面触液；将此晶振置于PSS(2mg／mL 中浸泡30min，至完成聚电解质的自组装．用PBS缓冲液洗涤．水洗，晾干备用。 取纯HSA(2．1mg／mL)20止，用pH3．0的NaAc-HAc缓冲渡稀释至30止，滴加于 晶振表面，于37 c‘的恒温箱内温育40mil3，取出，用PBS缓冲液洗涤，再水洗， 0．1 晾干；按同样操作，以30uL mol／mL的甘氨酸作封闭剂，封闭晶振表面上非特 O．9％)的 异性活性位点：将晶振安装于盛有3．0 7．0，NaCl mL的PBS缓冲液(pIJ 检测池中．注入待测抗HSA抗体，使发生免疫反应，记录反应的响应频率至反应 结束，由此计算出待测抗体的效价(活性)。 mogL mol／LNaOH和O．5NaCl混合溶液中洗潦 每次测定结束后，置于O．02 l moFL 0mill，晾干后备用。 5min，再用0．02HCl溶液和水各洗涤l 2．结果与讨论 2．1抗原的包被条件 实验结果表明，适于包被的pH值范围为3．0—4．0。因为HSA是两性物质，所 带静电量及其性质均与溶液口H值关系较大。其次，溶液中离子强度大于20 mmoFL，对HSA的包被有较大影响。可能是因为共存离子浓度过大会屏蔽晶振表 面部分电荷，导致溶液的表面张力与生物分子间的静电作用力降低，进而影响 HSA的包被量。HSA在晶振上达到包被平衡状态的HSA浓度为1-40 mg／mL。 135 2．2免疫反应的条件 与人体内生理环境相似，中性和低的离子强度是抗体与抗原反应的适宜条件。 96 因此，实验选择含0．9 7．0的PBS缓冲