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亚微米及纳米尺度上的生物分析化学 王柯敏 t湖南大学纯学计量学与化学生物蒋感技术教膏鄯重点实验室j 濑南大学生物技术研究院?潮南大学化学纯I学院410082。长沙) 细胞内化学成分的测定是细胞生物学、生物物理学、毒物学等领域重要的 研究方向之一。实时、在线、活体、原位测定细胞内化学物质的浓度和空间分 布情况，将为医学、生物学的研究提供有益的信息。 我们首先发展了亚微米光纤_pH传感器【I】。光导纤维用毛细管拉制机拉制 成亚微米光纤并将其表面硅烷化。荧光染料～丙烯酰胺荧光素通过光聚合共价 交联在硅烷化的光纤表面即制成亚微米光纤pH传感器。通过电荷耦合器件 (CCD)将采集的传感器的图像信息传至PC机中，同时将荧光信号连入荧光 分光光度计中，从而实现了pH的定量测量，并成功地用于鱼类活体胚胎的pH 监测，而常规方法实现这一测量需要将1000个活体细胞捣碎后才能进行。 分子信标DNA荧光探针是一种连有荧光基团和熄灭基团的聚寡核苷黢， 由于具有发夹结构使得荧光基团和熄灭基团靠拢而导致荧光基团的荧光很弱。 当和目标DNA杂交后，会发生构象的变化使得荧光基团和熄灭基团分开而又 使荧光显著增强。并且，这种DNA荧光探针可达到极限选择性，对单碱基不 匹配的单链聚寡核苷酸具有很高的识别性。在实际应用中，可用于重大疾病， 如鼻咽癌、地中海贫血的早期诊断以及mRNA的活体监测。因此，一系列基于 分子信标的DNA生物传感器已得到迅速发展【2l。其中我们用溶胶嵌胶法实现 了生物索化的牛血清白蛋白的包埋，通过生物素．亲合素反应固定分子信标在光 学波导和亚微米光纤掰的表面，制备了DNA生物传感器并将其用于活体细胞的 分析。这种传感器具有响应时间短、使用寿命长、检测下限低以及硬度高的特 点．使得在临床检测和生物技术的应用更加广阔。 为了进一步降低传感器的尺度，我们又发展了核壳型生物纳米颗粒，并建 立了相应的痕量分析新方法。纳米颗粒的核可以是荧光染料、半导体量子点、 磁性材料、金属材料以及生物活性分子。壳材料主要以二氧化硅、生物高分子 如蛋白质、多糖等为对象。所涉及的关键技术包括：核壳型纳米颗粒成核技术、 纳米颗粒包壳技术、核壳纳米颗粒表面生物分子修饰技术、以及纳米颗粒操纵 技术I”。 我们首先发展了基于生物荧光纳米颗粒得痕量分析方法田。采用油包水形 成的微胶囊与正硅酸乙酯水解产物共聚的方法，以荧光染料(联毗啶钌配合物： RuflDCopy)，)为核，在温和的条件下一步制备了具有氧化硅外壳的荧光纳米颗 粒。对该荧光纳米颗粒进行生物修饰固定羊抗人Ig(3抗体，获得具有特异识别 13 功能的生物荧光纳米颗粒，实现了对人外周血中SmIgG+B淋巴细胞的识别。这 种基于生物荧光纳米颗粒的荧光标记方法是一种将纳米技术、生物医学技术和 荧光分析技术紧密地融合在一起非传统的荧光分析新方法，在很大程度上克服 了传统荧光试剂的缺陷，如：荧光染料的稳定性显著提高；避免了荧光染料与 生物活性物质直接接触所带来的副作用；而且，由于这种荧光纳米颗粒的外壳 特别易于在其表面键合各种生物分子(如配体、特异蛋白、DNA等)，可以根 据特定的对象选择合适的生物分子进行修饰。另外，由于在单个纳米颗粒内就 可包住几千个荧光染料分子，当用其标记生物分子时，信号比传统的异硫氰酸 荧光素(FITC)标记方法显著提高。因此，这一新型的生物分手荧光标记方法 可望在生物学与医学研究领域的生物活性物质高灵敏度非同位素检测与分析(例 如：细胞膜抗原检测、小片段DNA染色体原位杂交、细胞染色、细胞识别等) 中发挥非常重要的作用。 我们对基于半导体量子点和磁性材料的生物纳米颗粒的研究正在进行中。 从已有的电镜照片结果来看，包壳后的磁性纳米颗粒粒度均匀核壳结构的引入 使得磁性材料的修饰问题得到了有效解决，生物修饰后的磁性纳米颗粒可望在 药物传递和生物分子的分离方面得到广泛应用。 参考文献 Ydao， He，Xiaohai Tang，Dan Li，Kemin