硅锆复合氧化物的制备、表征及其在磷酸化肽段富集中的应用.pdfVIP

第38卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第9期 2010年9月 ChineseJournalof Chemistry 1231—1237 Anai”icM DoI：10．3724／SP．J．1096．2010．01231 硅锆复合氧化物的制备、表征及其在磷酸化肽段富集中的应用 吴剑虹1 肖矿1 赵勇2 章伟平2 郭林吨 冯钰铸“ (武汉大学化学与分子科学学院，生物医学分析化学教育部重点实验室1， 生命科学学院2，武汉430072) 摘要采用溶胶-凝胶法制备了氧化硅·氧化锫复合氧化物(SiO：-ZrO：)，并对其物理与化学性质进行了详细 地表征。以a-酪蛋白的酶解产物为探针，比较r氧化硅．氧化锆复合氧化物与氧化锆对磷酸化肽段的富集能 化肽段的同收率更高。结合MALDI—TOF MS检测技术，Si02-ZrO：成功地应用于脱脂牛奶酶解产物中磷酸化 肽的分离和富集。 关键词氧化硅一氧化锆复合氧化物；磷酸化肽段；富集；基质辅助激光解吸飞行时问质谱 1 引 言 磷酸化是生物体内一种广泛的翻译后修饰形式。目前估计在任一时期真核生物总蛋白中都约有 1／3是被磷酸化的…。蛋白质可逆的磷酸化和去磷酸化控制着一系列的生物学过程，如信息传导、分子 识别及相互作用和其它的细胞活动旧J。若要在分子水平上认识这些过程，就需要对蛋白质的磷酸化位点 进行识别和鉴定。质谱的高灵敏度及强大的序列分析能力，使其成为蛋白质磷酸化分析的主要方法¨J。 由于生物样品中磷酸化肽段的含量通常很低，在质谱分析前需对磷酸化肽段进行富集。目前应用 最广泛的富集方法为固载金属离子亲和色谱法(IMAC)，但是该方法的选择性和重现性不高H”’7J。近 对多肽混合物中的磷酸化肽具有一定的选择性。其中氧化锆材料具有很好的化学稳定性，与PO]一之 间存在很强的Lewis酸碱作用，相比之下与其它酸根的作用则较弱，理论上ZrO：对磷酸化多肽应具有 较高的选择性。基于此原理，HAkansson等¨¨将ZrO：材料用于多肽混合物中磷酸化肽段的富集，并将 分析结果同TiO：的富集方法进行了比较。结果表明，ZrO：对只带有一个磷酸化位点的肽段有较好的富 集能力，但是对于带多个磷酸化位点的肽段，其富集能力不如TiO：材料，作者推测这一现象与材料的表 面化学性质相关，在实际应用中两种材料可互为补充。 复合氧化物通常表现出与单一氧化物不同的物理化学性质，如晶体结构、孑L结构、表面性质等。二 元或多元氧化物已被广泛用作催化剂、吸附剂、离子交换剂等¨4卅引。本课题组曾经从制备、表征到正 Zr02等作为色谱填料进行了较系统的研究m锄o，但是有关复合氧化物用于磷酸化肽的富集却鲜有报道。 本研究采用溶胶一凝胶法制备了硅锆复合氧化物(SiO：一ZrO：)，并对其物理化学性质进行了研究；将 该复合氧化物用于磷酸化肽的富集，并对富集条件进行了优化；考察了Si02-ZrO：在富集特性方面与单 一氧化物的不同，最终将其成功地应用于脱脂牛奶酶解产物中磷酸化肽的富集。 2010旬1聊收稿『；2010-04-21接受 本文系国家科技部973计划(No．2007CB914200)资助项目 ·Email：guol@whu．edu．On；yqfeng@whu．edu．cn 分析化学 第38卷 2实验部分 2．1仪器与试剂 DE Voyager XSAM800 320 静态氮吸附仪(北京精微高博科学技术有限公司)；DELTA 水装置(Milli—Q公司)。 HCI及其它试剂均为分析纯(上海国药集团化学试剂有限公司)；乙腈(HPLC，JKChemiea公司)；氨 购自超市。 2．2实验方法 2．2．1 ZrO：及硅锆复合氧化物材料的制备和表征ZrO：微球的制备旧¨：将16g氧氯化锆溶于12g 水中，依次分别加入2gSpan一80、2gTween一85和140mL石油醚，以1800r／rain搅拌