莲子草假隔链格孢毒素的分离纯化与结构鉴定.pdfVIP

Vol. 27 高等学校化学学报 No.8 2 006 年8 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSJTJES 1485 -1487 [研究简报] 莲子草假隔链格子包毒素的分离纯化与结构鉴定 周遗品1 ，向梅梅I ，姜子矿，李华乎2 ， .H、 伟1 ，林海琳1 ，匡因2 ( 1. 仲饱农业技术学院资源环搅系，广州 510225; 2. 华南农业大学资源环绕学院，广州 51侃42) 关键词 莲子革假隔链格袍;致病毒素;分离纯化;结构鉴定; 2-乙就~-3.4-二经基-5-甲氧基苯乙酸 中图分类号 0625.5; Q936; 侃5 文献标t只码 A 文章编号 025lm90川剧)08-1485.{l3 近年来，研究杂草病原真菌代谢产物的毒素物质，以寻找新的天然除草剂化合物或为仿生合成新 型除草剂提供依据，已经成为农田杂草生物防治研究的热点之一(1 -4J 莲子草假隔链格抱(Nimbya al- temantherae) 是从空心莲子草(Altemanthera philoxero阳)中分离到的一种叶斑病菌IS] ，研究发现，该病 菌代谢产物中含有使空心莲子草致病的毒素化合物(6.7 ) 本文从中分离纯化了一种毒素物质，并对其进 行了结构鉴定，为研究其致病机理及进一步的化学合成奠定了基础. 1 实验部分 1. 1 试剂与仪器 所用试剂均为国产分析纯试剂; OM-130 大孔吸附树脂由山东鲁抗医药股份有限公 司生产;柱层析用硅胶为上海五四化学试剂有限公司产品;硅胶板为上海信谊仪器厂生产. ZE四SCH OSC-2Q4差示扫描量热仪; ELEMENTAR VARIO EL 元素分析仪; VG ZAB-HS 质谱仪; BRUKER EQUIN0X55-A590/3F 红外光谱仪; INOVA-5∞核磁共振仪. 1.2 毒素活性的检测方法 选取健康无病的空心莲子草叶片，用消水漂洗后，用体积分数为70% 的 乙醇漫洗0.5 min ，双蒸水洗3 次，以滤纸吸干水分，用刀片切成O. 5 cm x O. 5 cm 的小块，放入用双蒸 水洗净的 10 mL离心管中，每管8 - 10 块，然后加入待测液I mL，以双蒸水作对照，重复处理3 次.将 离心管鑫上棉察后置于25 C光照培养箱中培养， 8 h 后开始观察叶块反应， 24h 后测量病斑宽度. 1. 3 毒素物质的分离纯化将经改良的 Fries 培养液分装入5∞ mL 三角瓶中，每瓶2∞此，灭菌后 接入于POA 上培养的试管斜茵茵种2 支，置于摇床上(28 C).以2∞ r/min 的速度连续振荡培养7 d. 以此为液体菌种，按体积比 1: 10 将其接入新的培养液中扩大培养.5d后，按体积比 1: 10 的比例接入 30 L Biostat 发酵罐中， 于28 C在以到)-5∞ r/min 的振荡速度和 12 Llmin 通气量条件下发酵培养 3 -4 d. 发酵液用白布过滤，定性滤纸抽滤后得到含霉素的培养滤液. 在培养滤液中加入113 体积的甲醇，搅拌混匀，过滤除去沉淀.将滤液于60 C下减压浓缩至近 干，加入少量甲醇溶解，形成浓稠状液体，然后上DM-130 大孔树脂色谱柱(7∞ mm x70 mm) ，用甲醇 洗脱.将收集的甲醇洗脱液减压浓缩至近千后，再用乙酸乙醋加热浸捷，过泼、除去不溶物.将滤液于 6OC下减压浓缩至干得到褐色粉状物，即为毒素粗提物. 称取毒素粗提物10.0 g 于150 mL 烧杯中，加入1∞ mL 体积比为 1 : I 的苯·丙翻溶液，于6OC水 浴中加热溶解，趁热过滤除去不溶物.将滤液子6OC水浴中蒸发浓缩至50 -60 mL，然后置于冰水浴 中冷却，自然挥发结晶.将所得晶体反复用体积比为 1: I 的苯-丙酣溶液溶解重结晶，得到一种含少量 棕色杂质的白色针状晶体.将得到的纯度较高的晶体按质量比1: 1 拌入柱层析磁跤，装入3∞ mm x 15 mm 的硅胶校中，用体积比为1: 1 的苯-丙翻溶液洗脱.将洗脱液浓缩至30 -40 mL，置于冰水浴中冷 却，自然挥发结晶，获得臼色针状晶体. 收梢日期， 2∞5(