分子生物研究法(上).ppt

免疫印迹法程序可分为五个部分： 蛋白样品的制备 经过SDS分离的样品 分离的蛋白转移到膜载体上，转移后将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附 用固定在膜上的蛋白作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合 洗去未结合的一抗，加入酶偶联或放射性标记的二抗，通过显色或放射自显影来检测蛋白。 用于二级抗体的检测有以下三种： 放射性标记的抗体 与酶偶联的抗体 与生物素相偶联的抗体 5.6.3 蛋白质质谱分析技术 　　蛋白质组学中最有意义的突破是用生物质谱鉴定电泳后分离的蛋白质。该技术是一种超灵敏的技术，从理论上说，仅需少量样品就可获得误率低于百万分之一的结果。 6.6 其他分子生物学技术 6.6.1 凝胶滞缓实验 凝胶滞缓试验（gel retardation assay）， 又叫作DNA迁移率变动试验（electophoretic mobility shift assay,EMSA），是用于体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。 在凝胶电泳中，由于电场的作用，裸露的DNA朝正电极移动的距离与其分子量的对数成反比。如果此时DNA分子与某种蛋白质相结合，那么，由于分子量增大，它在凝胶中的迁移作用便会受到阻滞，在特定电压和时间内朝正电 极移动的距离也就相应缩短了。 凝胶阻滞实验的基本原理图 放射性标记的DNA由于与一种细胞蛋白质B结合，于是在凝胶电泳中移动速度变慢，在放