核酸适配体在治疗肿瘤中作用.docVIP

核酸适配体在治疗肿瘤中的的作用 江西理工大学 邹涛 摘要： 核酸适配体是一类能够特异性地和靶物质结合的寡核苷酸序列。它可作用于蛋白质、金属离子、小分子化合物、细胞膜表面受体等靶标。该寡核苷酸序列可以是RNA也可以是DNA，较其他识别分子而言，适配体具有性质稳定、易合成、易标记、分子量较小和目标分子广泛等优势。其结合能力可与抗体相当甚至更强, 并可结合各种药物及载体构建多元复合靶向给药系统用于肿瘤靶向治疗, 在生物医学领域引起了极大的关注.。 关键词：核酸适配体；肿瘤治疗；量子点 1990年，Ellington与Szostak及Tuerk与Gold筛选出了能与T4 DNA聚合酶高亲和力和特异性结合的随机寡核苷酸，并命名为核酸适配体(aptamer,Apt)，该筛选方法被命名为指数富集的配体系统进化技术(SELEX)，原理是首先构建容量巨大的随机寡核苷酸序列库，然后经过多轮结合和洗脱，从中筛选得到能够和靶标物质高亲和力结合的寡核苷酸。核酸适配体是通过折叠形成特定空间结构而与靶标结合，其亲和力可与抗体相当，亲和常数(Kd)可达纳摩尔或皮摩尔水平。近年来，核酸适配体受到科学家的广泛关注，由于其分子量较小、可化学合成、生物相容性好等优点，其在基础、临床、药物开发中的研究不断增多，越来越多的针对生命活动中重要分子的适配体被筛选出来，各种基于核酸适配体的分析方法和技术也有报道，核酸适配体在生物医学、疾病诊疗领域已显示出广阔的应用前景。靶向配体在抗肿瘤药物靶向传递方面有很大的应用潜能，其对靶分子结合的选择性可赋予抗癌药物靶向特异性，同时增加药物在病变组织内的富集。核酸适配体可体外合成且易于修饰，同时因其带负电荷，在体循环中很少参加非特异性相互作用。它们对靶物质可高亲和力并特异性地结合，使其具有高的穿透性。抗肿瘤药物一般都是在细胞内发挥作用，提高药物摄取量是其有效性的关键。 纳米粒子能通过细胞内吞途径进入细胞，如果将核酸适配体连接到纳米粒子表面， 药物靶向肿瘤细胞后，可介导内吞发生，有利于提高药物摄取量，这种给药方式成为目前研究的热点。以下综述了核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的研究进展。 1 肿瘤标志物 肿瘤标志物(Tumor?Marker)是反映肿瘤存在的化学类物质。它们或不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量，它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质，借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能，以帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导。”生物素-亲和素”特异性相互作用构建了Apt-QDs探针。该探针表面的Aptamer可与靶细胞表面的特定受体分子发生选择性结合，将具有高荧光发射强度的QDs带到靶细胞表面，采用流式细胞仪对单个细胞荧光信号进行统计分析，即可实现靶细胞的有效检测。段诺等将核酸适配体识别技术与高灵敏荧光分析方法结合，建立了检测 O T A 的新方法，基于微孔板上固定的核酸适配子与目标物质OTA结合时构象发生变化,导致预先与其互补杂交的 FA M标记短链 DN A 解 离，引起荧光信号发生变化，据此可实现对OTA的 定量检测。 4 核酸适配体的荧光信号检测 由于核酸适配体体外合成能够根据实际需要对其进行化学修饰，故可设计在核酸适配体不同部位修饰荧光物质，经修饰的核酸适配体与靶物质结合后荧光物质发出的荧光信号会发生变化，实现靶物质的检测。如在适配体中部适当的位置修饰荧光物质( 如F C M，荧光胺 )，靶物质的结合引起荧光基团周围环境的改变，导致发射光的强度发生改变，产生响应信号，实现靶物质分子的检测。末端修饰荧光基团的核酸适配体，与靶物质结合后分子质量增大，荧光基团的旋转速度急剧变慢，导致荧光的各向异性发生改变。利用这种方法可以设计核酸适配体 荧光探针，实现均相中对适配体与目标分子的相互作用进行实时监测，并且能够高灵敏、高选择地定量检测目标物质。就以凝血酶的检测为例，目前，应用核酸适配体荧光检测蛋白主要是基于适配体与目标蛋白作用后产生的荧光偏振度或荧光强度的改变来检测蛋白.，核酸适配体荧光检测凝血酶也主要采用这两种方式，由于适配体与核酸作用结合后其分子量发生变化，从而引起偏振角度变化，用其检测蛋白，其信号变化范围较小，线性范围较窄，并且荧光偏振对非均相溶液的测定存在一定的局限性。也有人设计分子信标或分子开关与核酸适配体作用，其荧光强度在核酸适配体与目标蛋白结合前后产生变化（主要是由于分子间距离变化产生的荧光猝灭或是分子开关微环境变化产生的自猝灭作用），通过荧光强度的改变量来测定蛋白。徒永华等将一条5端带氨基修饰核酸适配体通过酰胺化反应固定于磁性纳米颗粒上，利用核酸适配体与凝血酶的强结合作用捕捉凝血酶分子，通过磁性分离技术去除杂蛋白干扰。另一条带荧光标记的核酸适配体结合凝血