核桃饼粕蛋白最佳酶解条件研究.docVIP

云南中医学院 2014届攻读学士学位本科生毕业论文(设计) 核桃饼粕蛋白酶解工艺的初步研究 二0一四年六月十六号 目 录 摘 要 3 1.引言 3 2.仪器与试剂 4 2.1 仪器 4 2.2 试剂 4 3.方法 4 3.1 核桃蛋白酶解工艺优化 4 3.1.1 酶解工艺流程 4 3.1.2总蛋白质含量的测定—凯氏定氮法 5 3.1.2.1原理： 5 3.1.2.2方法： 5 3.1.3 酸溶蛋白氮含量的测定： 5 3.1.4 游离氨基酸态氮（AN)的测定—甲醛滴定法 6 3.1.4.1原理 6 3.1.4.2方法 6 4.结果与讨论 6 4.1 核桃蛋白酶解工艺的确定 6 4.1.1单因素分析 6 4.1.1.1 超声时间对核桃水解作用的影响 6 4.1.1.2 最佳酶的选择 7 4.1.1.3 pH对酶解反应的影响 7 4.1.1.4 加酶量对酶解反应的影响 8 4.1.1.5 酶解温度对酶解反应的影响 9 4.1.1.6 酶解时间对酶解反应的影响 9 4.1.2正交实验确定最佳酶解条件 10 5.讨论 12 致 谢 14 核桃蛋白酶解工艺的初步研究 实习学生：陈 菱（2011级食品科学与工程班) 指导教师：赵声兰（教授、云南中医学院）摘 要：目的：研究超声时间对核桃蛋白提取的影响和核桃蛋白酶解的适宜工艺条件，为以后的核桃蛋白多肽的开发利用提供依据。方法：酶解工艺研究采用单因素法和正交实验法，游离氨基酸的测定采用甲醛滴定法，蛋白质的含量测定采用凯氏定氮法。结果：结论：与普通提取法相比，超声波提取法对核桃蛋白的溶出率有一定提高，水解度与多肽含量影响不大；酶解法的效果比较明显，酶解法核桃蛋白的溶出率，水解度和多肽含量都有大幅度提升。所以核桃蛋白的水解方法以酶解法较好。 关键词：酶解工艺；优化;核桃饼粕蛋白；多肽；游离氨基酸。 1.引言 核桃又名胡桃，羌桃，万岁子，系胡桃科核桃属植物，其使用部位为果实的仁，它与扁桃、腰果、榛子并列为世界四大干果。中国是世界上核桃产量最高的国家，2000年核桃栽培年产量达26万t［1］.核桃仁含有丰富的蛋白质，不饱和脂肪酸，维生素E和微量元素等，现代医学证明，核桃对各种不同年龄的人均有不同的医疗保健作用，因此，核桃是一种对人体有补气养血，温肠补肾，润肺止咳，乌发健脑作用的优良干果仁食物。核桃仁中的主要营养物质分为脂肪和蛋白质，8种人体必需脂肪酸构成合理，其中异亮氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸接近或超过WHO/FAO规定的氨基酸类人体必须量的标准值［2-4］。近来来科学研究发现，人类摄取蛋白质经消化酶作用后，并非主要以氨基酸形式吸收，而是以肽的形式吸收［5］。某些低肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质，同时具有防病治病、调节人体机能等多种生理功能，有些原蛋白质或其组成氨基酸所没有的独特的生理机能，但水解为多肽后会具有活性，这也是生物活性肽引起当今食品学界广泛重视的重要原因。特别是活性肽的组成氨基酸并不一定是必需氨基酸，这就为人类更为充分利用蛋白质资源，尤其是那些原本认为生物价不高的蛋白质资源生产能更好满足人类健康需要的基料，提供了新的机遇［6］。目前国内对核桃蛋白质的研究很多，但是对多肽的进一步研究是少之又少。本文综合考虑蛋白质溶出率，水解度和多肽含量三个指标，研究核桃蛋白质的降解工艺，为核桃的进一步开发利用奠定基础。 2.仪器与试剂 2.1 仪器 2.2 试剂 3 方法 3.1 ［7］［8］~4.5) → 离心（3500r/min,20min） → 除去沉淀与乳化层 → 清液3.1.2 分析方法［9］ 多肽含量=（酸溶蛋白质含量-游离氨基酸含量）×6.25 3.1.2.1总蛋白质含量的测定—凯氏定氮法［10-12］ 3.1.2.1.1原理： 样品加入浓硫酸消化，其中的氮素与硫酸反应生成硫酸铵，加碱蒸馏，用硼酸溶液吸收蒸馏出的氨气，硫酸滴定蒸馏中得到的硼酸铵。根据硫酸的消耗量计算待测样品的蛋白质含量。化学反应试如下：2NH2(CH2)2COOH + 13H2SO4 ?→ (NH4)2SO4 +6CO2 + 12SO2 + 16H2O (NH4)2SO4 + 2NaOH ?→ 2NH3 + 2H2O + Na2SO4 2NH3 + 4H3BO3 ?→ ?(NH4)2B4O7 + 5H2O (NH4)2B4O7 + H2SO4 + 5H2O ?→ (NH4)2SO4＋4H3BO4 3.1.2.1.2步骤： 取10ml清夜于洁净消化管中，加入0.10g硫酸铜，0.50g硫酸钾和10ml浓硫酸，于消化炉上消化至样液澄清透亮，取出，自然冷却，于凯氏定氮仪上