抗噬菌体苏氨酸基因工程菌菌株选育.pdfVIP

安徽农学通报，AnhuiA ．Sci．Bul1．2010，16(18) 17 抗噬菌体苏氨酸基因工程菌菌株选育 吴晓文 郭艳红 刘 峰 (福建师范大学生命科学学院，福建福州350108) 摘 要：为了解决苏氨酸基因工程菌受噬菌体的污染的问题 ，以产苏氨酸的基 因工程菌作为出发茵株 ，采用紫外诱 变，经初筛、复筛和验证试验，得到1株抗噬菌体的产苏氨酸菌株。 关键词：L一苏氨酸；紫外诱变；筛选 中图分类号Q78 文献标识码A 文献标识码1007-7731(2010)18-017-004 TheScreeningofthePhage—resistantGene-- EngineeringStrainsofL-Threonine W I1XiaowenGnoYanhongLiuFeng (CollegeofLifeSciences，FujianNormalUniversity；Fuzhou350108，China) Abstract：Inordertosolvethepollutionof1-threoninegeneticengineeringstrainsbyphages，Engineeringstrainsof 1-threoninewereusedasstartingstrains，thephage—resistantstrainsof1-threoninewerescreenedbyUV mutation， preliminaryscreening，secondscreeningandcompliancetestdemonstrationtest Keywords：L—threonine，Uvmutagenesis，Screening 苏氨酸为人体不能合成的8种必需氨基酸之一，人体必 pH6．8—7．2。(4)放在摇瓶发酵培养基(％)：蔗糖 8％，硫 须从食物中摄取…。它可以作为一种重要的营养强化剂 ，添 酸铵2．5％，磷酸二氢钾0．2％，七水硫酸镁0．1％，五水硫酸亚 加于食品中，起到提高蛋 白质的营养价值的作用雎】。它可以 铁0．05％，五水硫酸锰 0．05％，碳酸钙3％。碳酸钙单独干热 促进人体发育和具有抗脂肪肝 药用效能[31。它可以添加 灭菌160℃ lh，再与灭菌后的其他成分混合 ，培养液pH为 到饲料中，提高饲料的营养价值，降低饲喂成本，而且还能 6．8 — 7．2。 获得其他许多有益的作用[21o目前 ，在针对市场对苏氨酸的 1．2方法 需求量不断增加的情况下，国内外许多研究机构和公司通 1．2．1 菌体生长曲线的测定 取新鲜活化的斜面菌种 ，接 过基 因工程的方法构建的产苏氨酸菌株受噬菌体的污染 种于已灭菌装有20ml液体摇瓶种子培养基的250ml三角瓶 严重。本实验通过紫外诱变 ，经初筛、复筛，得到一株抗噬 中，置于回旋式摇床上37~C、240r／min，振荡培养。每隔2h取 菌体的产苏氨酸菌株，经过筛选和验证试验，获得的菌株 出3瓶 ，稀释2倍后 ，以蒸馏水为空 白对照，于562nm波长下 既有抗噬菌体的能力也有产苏氨酸的能力。 测定吸光度，求出平均值。以时间为横坐标，吸光度为纵坐 l材料与方法 标 ，绘制菌体生长曲线。 1．1材料 1．2．2 菌浓的测定 采用平板计数法来确定菌悬液的浓 1．1．1出发菌株Fc由某工厂提供。 度。用摇瓶将菌种培养12h至对数生长后期，将菌液依次稀 I．1．2噬菌体Pl从该工厂异常发酵液中分离得到。 释 至lO～、10～、l0一、lO～、10 、l0一、10