茶树上冰核活性细菌的分离、鉴定及防治.pdfVIP

1.文献综述 冰核活性细菌在霜冻害中起重要的作用。霜冻对农业是一种灾害，严重时这 种静态自然灾害可以在短时间内摧毁大片的农作物，给农业生产带来重大损失。 冰核活性细菌在霜冻害中的作用是降低植物细胞水的过冷却， 这种特性开辟了一 种新的防霜思路。如今，冰核活性细菌在各个领域被广泛开发利用，它是一种可 以广泛运用的生物资源，在制冰、人工降雨、低温促冻杀虫等领域有着杰出的效 果。 冰核活性细菌的研究最早在 1972年，Sc  hnell和 Vali首先报道分离了一种 [1 ]  冰核活性物质  。同年秋，Fresh R报道从腐烂的植物叶片上分离到一株细菌具 [2 ]  有冰核活性，经鉴定该菌株属于 Pseu domonas  。1974年，Maki L . R.等从即将 腐烂的薄叶桤木( Alnustenui folia Nutt .)叶片上分离到具有冰核活性的细菌， 经鉴 [3]  定该菌为丁香假单胞菌( Pseudomonas syringae van Hall)  ,并初步阐述了冰核活 性的机理，即冰核活性细菌诱导催化过冷却水形成冰晶。冰核活性细菌引起了许 多研 究者 的注意 ，研 究者有发现一些 欧文 氏菌属(Erwinia)和黄单胞菌属  (Xanthomonas)的种也具有冰核活性诱导过冷却水形成冰晶的能力。随着冰核活 性细菌研究的展开，冰核活性细菌的种类、分子生物学、冰核活性的影响因素及 应用等各方面研究取得了较大进展。1986年我国开始对冰核活性细菌展开研究， 研究方向从我国冰核活性细菌的种类和分布情况到它的分子生物学特性和应用 等。  1.1 冰核活性细菌的生物学及分子生物学研究  1.1.1简介 冰核活性细菌(  Ice Nucleation  Active Bacteria  ,简称  INA 细菌)能够在­2～  ­5℃的温度下诱导植物细胞中的过冷却水形成冰晶从而引起冰冻。冰核活性细菌 细菌 目前 发现 主要有  3  个 属 ，即欧文 氏菌属(  Erwinia)  、假 单胞菌属  ( Pseudomonas)、黄单胞菌属(Xanthomonas)，其中欧文氏菌属在肉汁胨平板上的 菌落呈黄色，周生鞭毛，细菌杆状；假单胞菌属的菌落呈白色，极生鞭毛，细菌 杆状；黄单胞菌属的菌落呈黄色，极生鞭毛，细菌杆状，革兰氏染色均呈阴性。 冰核活性细菌在自然界中广泛存在，一般都附着在植物表面上，当植物细胞内水 处于过冷却状态时，冰核活性细菌作为最强的异质冰核因子之一，能诱发冰晶形 成造成植物组织的冻害。冰核活性细菌的种类与数量在地球上存在着明显差异， 这些受地理纬度、植物种类、气候条件及不同季节的影响和制约。我国的冰核活 性细菌种类基本涵盖了所有的种，就目前发现的冰核活性细菌共有 3 个属、17 - 1 -  [9]  个种或变种  ，其中 6 个种为国内外首次记录具有冰核活性的细菌，分别为 cerealis，Pseudomonas sp (非荧光菌)，P. marginlis , P. syringae pvs , X. campestris pv ,E. herbicola pvs ,E. amylovola pvs .而且 P. syringae 和 E.ananas 为我国优势种类。  1.2  冰核活性细菌的分子生物学特性  1.2.1 冰核细菌的冰核基因 上世纪八十年代，随着生物技术的发展，运用分子生物学技术研究冰核活性 细菌，其成冰机理已基本阐述清楚，冰核活性细菌的成冰活性由一个结构基因决 定，如果该基因缺失或沉默则完全失去冰核活性。经过大量实验，冰核基因克隆 并在大肠杆菌( Escherichia coli )中大量表达。带有克隆基因的宿主也具有冰 核活性，大肠杆菌( Escherichia coli )中表达冰核活性的基因区域有 4. 0-5. 0 kb。 目前已发现的冰核基因有ina W,ice C,inaZ,inaA,inaX 和 inaE 等，对这些 编码冰核蛋白的基因做序列分析，其中 inaW 和 inaZ