第一章组织培养基础知识-11.pptVIP

▲指数生长期（Logarthmic growth phase）： 细胞增殖最旺盛时期，直至细胞培养容器生长面被C铺满一层。一般用细胞分裂指数（Mitotic index，MI）表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。体外培养一般细胞分裂指数介于0.1~0.5%，连续细胞系3%-5%。且受细胞种类培养液成分、pH、温度等影响。 一代C活力最佳期，适用于各种实验的最佳期。 细胞传代的三个阶段 指数生长期是细胞活力最好的时期，在接种细胞数量适宜情况下，指数生长期持续3-5d后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少，细胞相互接触汇合成片，呈现接触抑制（Contact inhibition）。而恶性细胞则无接触抑制现象，因此接触抑制可作为区分正常与癌细胞标志之一。 肿瘤细胞因无接触抑制现象，只要营养充分，细胞可持续增殖，密度进一步增大，当培养液中的营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑制（Density inhibition）。导致细胞分裂停止。 ▲ 停滞期（Stagnate phase）： 即细胞数量达到饱和密度后，细胞与营养液的交换面积减少，代谢产物积累，PH下降，细胞停止增殖，进入停滞期。在此时应及时进行换液传代，否则因细胞中毒受损，大量细胞出现死亡，至少再传1-2代后，细胞才能恢复。 细胞传代的三个阶段 一代生长曲线图示 SGC7901细胞1.细胞种类：人胃肿瘤细胞；2.培养的天数：2天；3.放大倍数：倒置显微镜 X100 游走型细胞　　此型细胞在支持物上散在生长，一般不连接成片，细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动。此型细胞不很稳定，有时亦难和其它型细胞相区别，在一定条件下，如培养基化学性质变动等，它们也可能呈成纤维细胞形态。 人肺癌细胞；培养的天数：1d－4d；放大倍速：倒置显微镜 X100；培养基种类：RPMI1640+10%小牛血清；细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，有伪足，贴壁生长 多形型细胞　　有一些组织和细胞，如神经组织的细胞等，难以确定他们规律和稳定的形态，可通归入多形细胞型。 2、悬浮型 细胞在培养时不粘附于支持物上，而是 呈悬浮生长状态，细胞悬浮生长时胞体为 圆形。 优点：细胞生存空间大 生长时间长 能繁殖出大量细胞。 悬浮型和贴附型的性质也不是一成不变的。在一定条件下,悬浮型细胞可呈贴附状生长。 由于培养细胞形态的易变性,在利用形态学指标判定细胞类型和其它一些变化时,应参考多方面指标,必要时应利用电镜来提供形态学依据。 （三）不同生长状态培养细胞的形态学鉴定 （四）培养细胞的生长特点 帖附 接触抑制 密度依赖性 （五）培养细胞的生长和增殖 1、单个细胞的生长过程 细胞周期：由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，叫细胞周期。分为4个期： G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间。 S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期。 G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间。 M期又称D期(mitosis or division)，细胞分裂开始到结束。 Phases of the Cell cycle ●Interphase: ▲G1 ▲ S ▲ G2 ● division phase (mitosis phase- M phase ) ▲ Nuclear division (Karyokinesis) ▲ cytoplasmic division ( Cytokinesis) Summary--interphase 2N DNA 4N DNA 4N DNA ▲增殖态C [G1，S，G 2，M] ： 进行C质复制，C核复制，C分裂三个连续过程，完 成一次称一个C周期。 [G1，S，G 2，M]共同构成 细胞增殖期，不可分割。 ▲功能态C （G0） ： 指C完成某次分裂后，进行特定功能活动（如：分泌， 收缩，吞噬），是C的一种分化态，命名为G0细胞。 新理论认为其不属于G1期，其处于两个增殖期之间， 是真正意义上的间期。 体内、外C都存在两种基本状态 G0i(G0 of interphase):是以增殖为主的细胞频繁分裂，G0期甚短，体内的某些干细胞，肿瘤细胞，离体培养细胞属于次种。 G0f1(G0 of function 1)：是以功能活动为主的细胞，G0期进行分化后的功能活动，但一定条件下，