离子交换-反相色谱法脱除胸腺肽α1盐离子.pdfVIP

第 29卷第 2期 安 徽 工 程 大 学 学 报 Vo1．29．No．2 2014年 6月 JournalofAnhuiPolytechnicUniversity Jun．，2014 文章编号：16722—477(2014)02—0042—04 离子交换一反相色谱法脱除胸腺肽 1盐离子 刘 标 ，陈阿娜 (安徽工程大学 生物与化学工程学院，安徽 芜湖 241O00) 摘要：分两步脱除胸腺肽 a1纯化过程中引入的盐离子．采用离子交换一反相色谱法脱除胸腺肽 1中的有机 盐 ，再 以反相液相色谱法除去无机盐 ，低温冷冻干燥最终获得胸腺肽 a1产 品，纯度为 99．2 ，收率为92．0 ， 含量为 99．9 。结果表明，以离子交换一反相色谱法脱除有机盐，反相色谱法脱除无机盐，最终得到合格胸腺 肽 1产品，为其他多肽的脱盐提供了新的思路． 关 键 词：胸腺肽 a1(Ta1)；离子交换一反相色谱(IE-RPLC)；离子排斥；脱盐 中图分类号：TQ464．7 文献标识码 ：A 胸腺肽 a1(Ta1)由28个氨基酸组成[1吨]，分子中含有 螺旋和 B折叠的二级结构[3]，这种特殊分子结 构导致在 Ta1合成过程中产生一些极性和带 电荷极为相近的杂质 ，给分离纯化带来极大的困难 ，生产 中 很难获得高纯度 Ta1．采用反相离子对液相色谱法作为分离手段[4蜘，成功制备出高纯度 Tal[6]，然而此方 法引入 了大量有机盐离子．对无机离子的脱除通常采用反相色谱法和离子色谱法_6。 ，而对于有机离子两 种方法均难 以去除，降低产物有效含量． 离子交换一反相色谱法是 以离子交换树脂为固定性，以一定浓度的有机相溶液为流动相，结合离子交 换和反相色谱的优势进行分离的一种方法．本文采用离子交换一反相色谱法脱盐[1，以离子交换树脂为固 定相，以一定浓度的乙醇溶液为洗脱液，洗脱时改变 Tal的带电状态，与离子对试剂形成离子排斥，将 Tal与离子对试剂分开，达到脱除有机盐的 目的，再以反相色谱法将引入 的无机盐脱除，经冷冻干燥得到 高纯 Ta1冻干粉．建立了完整的Tal脱盐工艺 ，为其他多肽的的脱盐提供参考． 1 材料与方法 1．1 仪器 分析型 HPLC (岛津公司)，月旭分析色谱柱 (ODS柱 4．6×250mm，5urn)；制备型 HPLC(~g京创新 通恒科技有限公司)，制备型色谱柱(WatersODS柱 2O×250mm，IOum)；固相萃取柱(DEAESapharose fastflow，10mL，GE公司)；R一210型旋转蒸发仪 (瑞士 BUCHI公司)． 1．2 试剂 乙醇购 自国药集团，乙腈购 自美国天地试剂公司，Tal精制液为实验室 自制 ，Tal自制对照品． 1．3 离子交换一反相色谱法脱除有机盐 取 自制纯度为 99．2 (面积归一化法测定)的Tal精制液 20mg，其 中含有浓度为 15 (v／v)的乙 腈 ，有机盐为四甲基氢氧化铵 (TMAOH)[63．将精制液用稀盐酸调整 pH至 2．O～2．7，上强酸性阳离子交 换固相萃取柱，使样品完全挂柱，pH为 7．O～7．5的稀氨水冲洗 6个柱体积，然后依次选择不同浓度的乙 醇氨水溶液洗脱，最终选择能够脱盐又能将 目的肽洗脱下来的洗脱浓度． 1．4 反相色谱法脱除无机盐 将 1．3中制备得到的 目的溶液加压蒸馏除去大部分乙醇，上反相色谱柱，使用浓度为50mmol·mL 的醋酸铵水溶液冲洗 ，除去其他无机盐，再 以纯水冲洗色谱柱 6个柱体积，洗去醋酸铵，最后 以浓度为 5O96／(v／v)的乙腈水溶液洗脱下来，得到脱盐后的精制液． 1．5 浓缩、冻干 将脱盐精制液经旋转蒸发仪加压浓缩至质量浓度为 5O～80mg ·mL_。，再经低温冷冻干燥成冻干 一 收稿 日期 ：2014—03—03 作者简介：刘 标 (1981一)，男，安徽阜阳人，工程师，硕士 第 2期 刘 标 ，离子交换一反相色谱法脱除胸腺肽 n1盐离子