离子交换层析法制备高纯度人凝血因子Ⅷ的研究.pdfVIP

Chinese．1ournafofNew Drugs2015，24(7) 刘 晓，韩国德 ，李 青 ，郭广兆 ，包正琦 ，张 金 ，张安 山，何彦林 (兰州生物制品研究所有限责任公司，兰州 730046) [摘要] 目的：从血浆冷沉淀 中采用离子交换层析法纯化人凝血 因子Ⅷ。方法 ：冰冻血浆在2—8℃环 境下融化，离心法收获冷沉淀。用注射用水溶解冷沉淀，探索了5种冷沉淀溶解液预纯化 的方法。冷沉淀溶 解液经 S／D病毒灭活后采用离子交换层析纯化人凝血 因子Ⅷ ，经超滤、配制、除菌分装、冻干、干热病毒灭 活 ，获得人凝血因子Ⅷ成品，分别检测流穿液、洗涤液和洗脱液 中入凝血 因子Ⅷ 效价和蛋 白含量。观察 了冻 干和不同干热条件前后凝血 因子Ⅷ活性的变化。观察人凝血 因子Ⅷ冻干 品的外观和复溶时间。结果 ：冷沉 淀 中人凝血 因子Ⅷ 的回收率为40％～70％。5种冷沉淀溶解液预纯化方法 中，用盐酸调节pH至6．6、6．3的 方法人凝血 因子Ⅷ 回收率较高。离子交换层析流穿液 中FⅧ损失率小于 5％，而洗涤液 中FV$损失率较高， 最高损失率超过 20％。人凝血 因子Ⅷ 中蛋 白质含量较低 ，均小于 0．65mg·mL～，比活性为 50～100 IU·mL 。吐温一8O和 TNBP的残 留量均符合 《中国药典》的要求。冻干过程 中人凝血 因子Ⅷ效价下 降大约 1％ ～5％。100℃，30min干热处理对 FV$效价的破坏小于80℃，72h。入凝血 因子Ⅷ冻干品外观和复溶 时 间均达到中国药典标准。结论 ：采用离子交换层析法从血浆冷沉淀 中分离出高纯度人凝血因子Ⅷ ，可 以进行 工艺放大研 究 。 [关键词 ] 人凝血 因子Ⅷ；离子交换层析；冷沉淀；血浆 [中图分类号]R733．73 [文献标志码]A [文章编号]1003—3734(2015)07—0760—06 PreparationofhighpurityhumancoagulationfactorⅧ usingionexchangechromatography LIUXiao，HANGuo—de，LIQing，GUOGuang—zhao，BAOZheng—qi，ZHANGJin，ZHANGAn—shan，HEYan-lin (LanzhouInstituteofBiologicalProductsCo．，Ltd．，Lanzhou730046，China) [Abstract] Objective：Topuri~coagulationfactorⅧ fromhumanplasmausingionexchangechromatogra— phy．M ethods：Thecryoprecipitatewasharvestedbyusingcentrifugationafterthawingoffreshfrozenplasmaunder 2～8℃．Thecryoprecipitatewasdissolvedwithwaterforinjection．andfiveprepurificationmethodsofdissolved cryoprecipitateliquidwereexplored．ThecoagulationfactorⅧ waspurifiedbyusingionexchangechromatography afterinactivationofvirusfollowedbyultrafihration，preparation，asepticpackaging，lyophilization，anddryheatinac— tivationofvirustoobtainthefinalproducts．TheactivityandproteincontentofcoagulationfactorⅧ intheflowing throughliquid，washingliquid，andelutionliquidweredetermined．TheactivitiesofcoagulationfactorⅧ products underinglyophilizatioanddry heatinactivationofviruswerecompared．Theappearanceanddissolvingtimeofco— agulation