饮用水中5种致病菌多重PCR技术检测研究.pdfVIP

· 102· 微 生物学通报 2005年32(3) 饮用水中5种致病菌多重PCR技术检测研究 范宏英，吴清平 吴若菁 寇晓霞， 张菊梅 吴慧清 (广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室 广州 510070) (福建师范大学 福州 350007) (中国科学院武汉病毒研究所 武汉 430071) 摘要：沙门氏菌 (Salmonellasp．)、志贺氏菌 (Shigelalsp．)、绿脓杆菌 (Pseudomonas aeruginosa)、肠出血型大肠杆菌O157(EterohaemorrhagicO157)和副溶血弧菌 (V／bro／rah— aemolyticus)是5种饮用水中不得检出食源性致病菌，根据它们的毒素基因、高度保守基 因及特异性基因，设计合成5对寡核苷酸引物，应用PCR技术对10个属的30株细菌进行 引物特异性检测。通过对多重PCR反应体系、条件进行优化，显著提高了检测灵敏度。初 步应用于水样分析中，极大的缩短了检测时间、降低了成本。实验结果表明：5对寡核苷 酸引物都具较高的特异性和专一性，多重PCR检测灵敏度达到10一10cfu，检测需5 6h，在水样检测的初步应用中得到了均一、稳定、清晰的结果，可推广应用于环境监测、 水源检测、食品卫生监督、商品检验检疫等领域。 关键词：多重PCR，食源性致病菌，检测 中图分类号：TS207．4 文献标识码：A 文章编号：0253—2654(2005103-0102-06 StudyonDetectionofFive-kindsofPathogenicBacteriainDrinking WaterbyMultiplex-PCR FANHong—Yingr WUQing—Ping wuRuo—Jing KOUXiao—Xia， ZHANGJu—Mei WUHui—Qing (GuangdongProvincialKeyLaboratoryofMicrobialCultureCollectionandApplciatoin GuangdongInstituteofMciroboilogy，Guangzhou510070) (FujainNormalUniversity，Fuzhou350007) (WuhanInsttiuteofVirology，ChineseAcademyofScience，Wuhan430071) Abstract：Thefivekindsoffood—homepathogenicbacteriaincludingSalnronellasp． Shigellasp．、Pseudo． 、 ，7zo， aeruginosa EterohaemorrhagciOl57andVibriorahaemolytciusthatcouldn’tbedetectedindrinking water．Thefivepairsofprimersweredesignedandcomposedaccordingtothetoxingenes ． high—conservative genesnadspecificgenesofthesepathogen,．；．Thespecificityofindividualprimerpairs inPCRwasevalu~edon DNA templatesofmolethanthirtydifferentbacterial isolatesfromtenspecies．Throughoptimizingthesystem nad