06现代分离方法2.ppt

思考题 1、毛细管电泳与经典电泳法的根本区别是什么？ 2、毛细管电泳各分离模式的特点和主要应用？ * * * * * * * * * * * * * * 七 亲和毛细管电泳 Affinity capillary electrophoresis 亲和毛细管电泳是指在电泳过程中具有生物专一性亲和力的两种分子（受体和其配体）间，发生了特异性相互作用，形成了受体—配体复合物，从而与其它物质分离，该方法特别适用于生物活性分子如蛋白质、抗生素、核酸等的分析以及药物中的手性选择。 八、非胶毛细管电泳 Non gel capillary electrophoresis 指介质中以有机溶剂占主要部分，即表现为非水体系的性质。能承受更高的操作电压产生的高电场，有更高的分享效率，也可在不增大焦耳热的条件下提高溶液中的离子浓度或增大毛细管的内径，从而增大进样量。 优点：使用超大内径毛细管柱、快速分析、降低吸附、提高分离选择性、有利于难溶于水及在水中不稳定的化合物的分离、对中性物质的分离、对手性物质的分离 高效毛细管电泳仪high performance capillary electrophoresis apparatus 一.仪器 二、仪器流程与主要部件 process and main assembly CE有很多不同的分离模式，但所用仪器构造却可以一样，这是其它分离技术难以企及的。 主要构造：电泳电源、毛细管柱、流体驱动单元、位移控制单元、检测单元，温度控制单元、数据管理单元、自动控制单元。 1.高压电源 （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流高压电源；输出电流0 ～250 mA （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统；三种输出模式：梯度电压、梯度电流、梯度功率 （4）电压稳定性：1%； （5）电源极性易转换； 毛细管是CE分离的心脏。理想的毛细管必须是电绝缘、紫外/可见光透明且富有弹性的，目前可以使用的有玻璃、熔融石英或聚四氟乙烯塑料等。毛细管内径一般为10　～100μm，其截面结构图标意图如图17.23所示。 2. 毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度=1m 3、流体驱动单元 关键功能：进样、毛细管清洗、淋洗剂流速控制 驱动力：正压、负压（获真空）、电场（包括电渗）、浓差扩散 正压：钢瓶压缩气、空压机、色谱泵等产生，空管进样：3-7kPa；清洗：5bar（=0.5MPa）；配二元梯度泵，可实现梯度淋洗 负压：小型真空泵，用于：脱气空管CE清洗和进样 电场：进样和毛细管平衡，可和电泳电源共用 浓差扩散：浓度梯度（天然动力） 4、位移控制单元 关键功能：毛细管升降、电极槽换位、流出组分转移 方式：转动、直线平移、升降 模式：手动和自动 5.缓冲液池 化学惰性，机械稳定性好； 6、温度控制单元 CE分离和效率受温度影响很大 理想控温方法：冷却、加温和恒温 控温范围：0-70 ?C（至少15-50?C） 控温方式：气冷（空气强制对流）和液冷（注入液体），液冷控温效果比较好，但是装置复杂，液冷介质一般为氟代烷烃、 7、检测单元 检测方式 质量检测限(mol) 浓度检测限(M)* 优缺点 紫外-可见光吸收 10-13～10-16 10-5～10-8 接近通用型 DAD可给出光谱信息 荧光 10-15～10-17 10-7～10-9 灵敏度高 样品常需衍生化 激光诱导荧光 10-18～10-20 10-14～10-16 极端灵敏 样品常需衍生化 安培 10-18～10-19 10-10～10-11 选择性好 用专门装置测电活性组分 电导 10-15～10-16 10-7～10-8 通用型 用专门装置和毛细管处理 质谱 10-16～10-17 10-8～10-9 灵敏，可给出结构信息 接口复杂 其它：化学发光、激光拉曼、红外、激光折射指数、激光热透镜 1) 紫外检测器(UV) 在合适位置除去涂层，将透明部分对准光路。 UV检测器集中在提高灵敏度，可采用毛细管弯折、吹泡技术扩大光路。或采用平面积分检测池，这种设计可使检测光路增加到1cm。也有用光散射二极管(LEDS)作光源，其线性范围和信噪比优于汞灯。总体来说进展不大。 2) 激光诱导荧光检测[LIF] LIF是CE最灵敏的检测器之一，极大地拓展了CE的应用，DNA测序就须用LIF，单细胞和单分子检测也离不开LIF。利用CE-LIF技术可检出染色的单个DNA分子，有望用于癌症的早期诊断及临床酶和免疫学检测等。CE／LIF和微透析结合可测定脑中神经肽。采用波长分辨荧光检测器可提供有关蛋白和DNA序列的一