纳米TiO2固载脂肪酶及其固载界面表征.pdfVIP

第29卷第2期 安徽工程大学学报 V01．29．No．2 2014年6月 ofAnhui Journal Polytechnic University Jun．。2014 文章编号：16722—477(2014)02—0009—04 纳米Ti02固载脂肪酶及其固载界面表征 周 朋，陶玉贵。，曹 宁，张 健，刘任龙 (安徽工程大学生物与化学工程学院，安徽芜湖 241000) 摘要：以3种不同形貌的纳米TiOz为载体固定化脂肪酶，研究载体形貌、酶添加量、pH值、温度和时间对固 mL 载酶活性的影响．研究结果表明，纳米线形貌TiOz固定化效果最好，最优固定化条件为加酶量0．25 g／25 溶液、pH7．0、固载温度40℃、固载时间6．3 h．利用SEM、XRD、FT-IR等对固载酶及其界面进行表征，SEM 和XRD结果表明，脂肪酶吸附于纳米线TiOz载体表面，且未改变纳米线TiO：的晶型结构；FT-IR表征表明 固载酶含有脂肪酶的特征吸收峰；比表面积分析显示固定化后样品的BET明显减小，表明脂肪酶在纳米线 Tioz表面进行物理型吸附． 关键词：纳米TiOz；脂肪酶；固定化；表征 中圈分类号：TB34 文献标识码：A 脂肪酶又称三酰甘油酯水解酶(EC3．1．1．3)，可以专一高效地催化分解甘油三酯，普遍存在于动植物 和微生物中[1≈]．脂肪酶广泛应用于医药、化工、食品和化妆品等行业‘4。5|．相较于游离酶而言，固定化酶有 着更好的操作稳定性，有利于下游产物的分离纯化，便于回收重复利用印]． 目前，利用纳米无机材料作为酶固定化的载体已得到广泛应用[7’8]．无机材料TiO。对有机物质具有 较好的吸附性，生物亲和性好、无毒害，化学稳定性好，机械强度高，将会是很好的酶固定化载体‘争10]．在酶 的固定化中，酶与载体表面的作用方式可能会引起酶结构的变异，增加底物与酶活中心的空间位阻，从而 导致酶活力下降、酶固定量也受到限制．因而，研究酶蛋白在载体表面的界面特性是酶固定化的关键m]． 本文在前期仿生合成纳米TiOz基础上，分别以仿生合成的纳米线、纳米花以及纳米片TiO。为载体 表征固定化酶，对纳米TiO：载体固定脂肪酶的界面特性进行了初步探究． 1 实验部分 1．1实验药品 脂肪酶，牛血清蛋白，考马斯亮蓝，聚乙烯醇(PVP)，无水乙醇，橄榄油，均为化学纯，国药集团化学试 Radius 剂有限公司；Ti02纳米线(锐钛矿，SBET一312．581T12／g，Pore Dv(r)=16．69nm)、纳米花 Radius (Ti02／ZnO复合体，S髓一219．54m2／g，Pore Dv(r)=18．53 nm)以及纳米片(钛酸盐，S唧= 169．50 RadiusDv(r)一48．44 m2／g，Pore nm)载体均为实验室自制． 1．2酶固定化方法 在25mL浓度为0。1 mol／L的磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH=7．5)中加入一定量的酶粉，搅拌0．5h使 之充分溶解．然后将0．5 g载体(静置在pH=7．0，浓度0．1mol／mL的磷酸缓冲溶液24h)加入脂肪酶的 PBS中，室温下搅拌一定时间，过滤，将固定化酶用滤液反覆洗涤，收集滤液，滤液待用，以便测定滤液中 酶的活力．所得的固体干燥至恒重，得到固定化酶． 1