e基因家族的全长cDNA克隆及表达分析.PDFVIP

江苏农业科学　２０１６年第４４卷第４期 — ４１— 翟立红，周兰庭，韩　鹏，等．玉米Ａｒｇｏａｎｕｔｅ基因家族的全长ｃＤＮＡ克隆与表达分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（４）：４１－４５． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．０４．０１１ 玉米Ａｒｇｏａｎｕｔｅ基因家族的全长ｃＤＮＡ克隆与表达分析 １ １ １ １，２ 翟立红 ，周兰庭 ，韩　鹏 ，腾　峰 （１．湖北文理学院生物化学与分子生物学系，湖北襄阳４４１０５３；２．湖北腾龙种业有限公司，湖北利川４４５４００） 　　摘要：Ａｒｇｏｎａｕｔｅ（ＡＧＯ）蛋白是小ＲＮＡ分子诱导的沉默复合体（ＲＩＳＣ）的核心因子，以玉米自交系Ｂ７３为材料，利 用ＲＬＭ－ＲＡＣＥ技术，克隆得到玉米１７个ＡＧＯ基因的全长ｃＤＮＡ序列，发现６个成员具有５′非翻译外显子，可能其表 达受此机制调控。同时，利用半定量 ＲＴ－ＰＣＲ对其在玉米幼苗不同根系组织（包括初生胚根、冠根、次生胚根和侧 根）进行表达分析，结果表明：未检测到ＺｍＡＧＯ５ｂ、ＺｍＡＧＯ１８ｂ表达，ＺｍＡＧＯ１ａ／ｂ、ＺｍＡＧＯ２ａ、ＺｍＡＧＯ１０在各类根系中高 水平表达，其他１１个ＺｍＡＧＯｓ表达水平较低，因此揭示选择性表达不同的ＺｍＡＧＯｓ可能是不同类型的根系分化及其 功能的精细调控所必需的。 　　关键词：Ａｒｇｏｎａｕｔｅ基因；克隆；５′非翻译外显子；表达 　　中图分类号：Ｓ５１３．０１；Ｑ７８５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）０４－００４１－０４ 　　在真核生物中，小 ＲＮＡ（ｓｍａｌｌＲＮＡ：ｓＲＮＡ）介导转录水 水稻和拟南芥ＡＧＯ蛋白划分为四大类，分别为ＡＧＯ１、ＭＥＬ１／ ［１５］ 平、转录后水平以及染色质水平的基因沉默。植物内源 ＡＧＯ５、ＺＩＰＰＹ／ＡＧＯ７和 ＡＧＯ４ 。Ｚｈａｉ等将玉米中的ＡＧＯ ｓＲＮＡ包括 ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）和各类小干扰 ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ 蛋白划分为五大类，将与ＯｓＡＧＯ１８同源性较高的２个蛋白单 ［１］ ［１６］ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ，ｓｉＲＮＡ） 。在已知的由ｓＲＮＡ介导的基因表 独划为一类 。目前证实，植物中的ＡＧＯ１主要参与ｍｉＲＮＡ 达调控途径中，ｓＲＮＡ必须与Ａｒｇｏｎａｕｔｅ（ＡＧＯ）蛋白形成沉默 通路，在植物的各个生长发育阶段均起着重要的调控作 ［９，１７］ 复合体（ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄｓｉｌｅｎｃｉｎｇｃｏｍｐｌｅｘ：ＲＩＳＣ）引导ｓＲＮＡ通 用 。在拟南芥中，与ＡｔＡＧＯ１亲缘关系最近的ＡｔＡＧＯ１０ 过序列互补与靶标（ＲＮＡ或ＤＮＡ）结合，进而降解 ｍＲＮＡ、抑 突变后表现为茎尖分生组织发育异常，ＡｔＡＧＯ１和ＡｔＡＧＯ１０ ［１］ 制翻译或修饰染色质 。由此可见，ＡＧＯ蛋白是 ｓＲＮＡ行使 竞争结合ｍｉＲ１６５／ｍｉＲ１６６，调节ＨＤ－ＺＩＰ 的表达，进而调 Ⅲ ［１８］ 其功能的重要因子。Ａｒｇｏｎａｕｔｅ蛋白最初是在植