甘露聚糖酶m口比3基因的重组和其在短短芽孢杆菌中的表达.PDFVIP

浙江大学学报(农业与生命科学版) 34(4)：389～394，2008 of J帅咖l Zheji柚gUnive璐ity(Agric．＆Lifesci．) 文章编号：1008—9209(2008)04一0389一06 甘露聚糖酶m口比3基因的重组及其在短短芽孢杆菌中的表达 周海燕，饶力群，吴永尧 (湖南农业大学生物科学技术学院生化与发酵工程实验室，湖南长沙410128) 摘 要：为了提高甘露聚糖酶Man23的表达量，降低它的体外降解程度，将其基因连接到质粒pHY_ p43上，由强启动子p43启动基因m口圮3的表达．将构建的重组质粒pHY—p43一man23转化至短短芽孢 U·mL～，较出发 杆茵(BM口拍nci￡￡Hs6re讲s)中，经转化的B，6仲掣如发酵后的上清液中酶活高速22480 茵株B口f洲“s5“6fiz缸B23所产生的甘露聚糖酶活力提高了26．7％．B．6地讲s体系的表达产物经SD§ PAGE检测，其图谱比出发菌株表达产物的更为明晰。目的蛋白带更宽，带色更深，说明目的酶的产量得 到了大幅提高，表达产物得到了明显纯化．试验表明以p43为启动子，B．6州谢s为表达质粒的宿主茵， 不仅保证了基因产物的分泌和正确折叠，而且实现了基因的高表达和产物的高活力． 关键词：甘露聚糖酶；短短芽孢杆茵；p43启动子；高效表达 中图分类号：Q6 文献标识码：A ZHOU Hai—yan，RAOLi—qun，WUYonFyao(L口6o，Bioc^Pm纽删伽dnrmP挖f丑fio挖E疗∥托PP而增， 4】D】28，C．^i行口) Lkiz胛，百i￡y，C矗口ngs^n CbzzPgPo，BiosfiPnfP口珂dBiofPf^理oZog3，，H“竹nnAgric群Zf比r口Z its of Re∞mbi胍tionof and Zhejiang mann蚰a靶ge眦卅口砬3expre鹞i吼ln且，PW蚰dIfH墨打P1，i覃．Joumal University(Agric．I。ifeSci．)，2008，34(4)：389—394 its the Abstract：Tothe ofmannanase(Man23)andreducedegradationi挖钞ifrD， promoteproduction t撇，123 was witha vector recombinant ligated pHY—p43．The plasmidpHl卜p43一 gene high—expression 6他口如．Them口以3 the man23wastransformedintoB卯t，i缸ci““s by strongpmmoterp43 generegulated mannanaseof22480 whichwas than strainBnfiff“s produced activity U．mL～1， 26．7％higheroriginal