3.2月季的花药培养.ppt

课题2 月季的花药培养 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 （一）被子植物的花粉发育 雄蕊 花粉是由花粉母细胞（小孢子母细胞）历经减数分裂、有丝分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历：小孢子四分体时期、单核期、双核期等阶段。 （一）被子植物的花粉发育 被子植物花粉的发育过程 小孢子 母细胞 4个 小孢子 1个小孢子 （单核居中期） 花粉管 细胞核 生殖 细胞核 营养 细胞 生殖 细胞 精子 精子 减数分裂 有丝分裂 有丝分裂 特点：细胞质浓厚 小孢子 母细胞 4个 小孢子 1个小孢子 （单核居中期） 花粉管 细胞核 生殖 细胞核 营养 细胞 生殖 细胞 精子 精子 减数分裂 有丝分裂 有丝分裂 （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 体细胞胚（胚状体）： 在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为体细胞胚（胚状体）。 胚状体 直接由器官产生 由单个细胞产生 由愈伤组织产生 （三）影响花药培养的因素 材料的选择 花期：初花期 花粉：单核期（细胞核由中央移向细胞一侧） 花蕾：完全未开放 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 培养基的组成 亲本植物的生长条件 材料的低温预处理 接种密度 在一定程度上抑制花药立体后小孢子的衰败， 使小孢子的存活时间延长。 （一）材料的选择 　　选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 　　最常用的方法有醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 实验操作 （二）材料的消毒 1. 将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30s 2. 无菌水清洗 3. 无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4. 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中 2~4min（也可质量分数为1%的次氯酸钙 溶液或饱和漂白粉溶液） 5. 无菌水冲洗3~5次 （三 ）接种和培养 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 （三 ）接种和培养 通常每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化。（主要原因是营养核和生殖核融合造成的。）故需对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选。 （三 ）接种和培养 植物组织培养技术与花药培养技术的比较 项目 相同点 不同点 植物组织培养技术 离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。 外植体为体细胞，染色体数无需加倍。 花药培养技术 取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。