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(二)、分离纯化法 色谱法按两相的状态分为： 液相色谱（流动相为液体）和 气相色谱（流动相为气体）。 液相色谱又分为 液-固色谱和 液-液色谱； 气相色谱又分为 气-固色谱和 气-液色谱。 色谱法的分类 (二)、分离纯化法 色谱法按机理分类（色谱的主要分类方法） 色谱柱名称 层析的原理 吸附色谱 物理吸附 （范德华力作用） 分配色谱 分配原理（分配系数） 离子交换色谱 离子交换 凝胶色谱 分子筛作用 聚酰胺色谱 半化学吸附（氢键作用） 大孔吸附树脂 物理吸附、氢键吸附和分子筛作用 气相色谱 吸附和分配原理 高效液相色谱 吸附和分配原理 液相色谱发展史 1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919) 碳酸钙吸附剂 石油醚洗脱剂 1940′s - 分配色谱和纸色谱 1950′s - 气相、 薄层、凝胶过滤色谱 、 梯度洗脱色谱 1960′s - 商业高效液相色谱. (二)、分离纯化法 （1） 吸附层析法 吸附层析法的原理：利用混合物中各组分对固体吸附剂（固定相）吸附能力的不同而达到分离的层析方法。 吸附剂：常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、活性炭、硅酸镁、氧化镁等。 物理吸附：无选择性，吸附与解吸可逆。 柱色谱中样品的洗脱 装载 样品 装载 溶剂 重力 洗脱 玻璃柱 硅胶 氧化铝 纤维素 糖类粉末 滤网 10 50 100 150 Volume (mL) Time (hr) 1.0 2.0 3.0 4.0 吸附层析是由： 吸附剂、 洗脱剂、 被分离的样品三部分构成的。 (二)、分离纯化法 吸附剂 极性吸附剂（ 如硅胶、氧化铝) 极性强，吸附力大(洗脱时洗脱力随洗脱剂的极性增强而增大)。 非极性吸附剂 (如活性炭--对非极性化合物的吸附力强(洗脱时洗脱力随洗脱剂的极性降低而增大)。 （1） 吸附层析法 (二)、分离纯化法 （1） 吸附层析法 氧化铝（Al2O3 ）适合分离脂溶性成分（如：生物碱 、甾体和挥发油 ）。 　　硅胶(SiO2 XH2O)适合分离水溶性和脂溶性成分。 活性炭适合水溶性成分的分离，如氨基酸、糖和苷的分离。 硅胶和氧化铝的吸附能力与含水量有关。一般用前要活化。 含水量低、活性高，吸附力强。 含水量高、活性低、吸附力弱。 氧化铝活化要在马弗炉中400℃、6小时，得Ⅱ~Ⅲ级氧化铝。 硅胶活化要在100~110 ℃、0.5~1小时。 (二)、分离纯化法 吸附力大小是依据“相似者相溶” 的原理；根据化合物吸附力大小的不同达到分离（与化合物的极性相关。) 被分离的样品: 化合物的吸附力 (二)、分离纯化法 洗脱剂: 用单一溶剂或混合溶剂。 一般是由低极性溶剂到高极性溶剂。 (二)、分离纯化法 吸附层析的操作 操作方式：吸附柱层析： 干法装柱 湿法装柱 吸附薄层层析 a.装柱 样品：吸附剂 Al2O3 为 1 : 20 ~ 50 （极性小的可 1 : 100）， 样品：吸附剂 SiO2 为 1 : 30 ~ 100 （?极性相近的可 1: 300 ~ 400） 层析柱规格 1 : 10 ~ 30（直径 : 高度） 原则 ： 均匀、致密，无气泡、无缝隙。 ( 1 ) 干法装柱 ： 底部塞脱脂棉，敲击，顿击。与TLC吻合度较好，溶剂消耗少，需加压洗脱。 ( 2 ) 湿法装柱 ： 倒入溶剂后，加吸附剂； 吸附剂与溶剂 搅拌后，倒入柱中。均匀，前沿整齐。 干法装柱 湿法装柱 柱分离 吸附柱层析 b.上样 1) 干法 干法上样 2) 湿法 溶剂溶解上样（少量） (二)、分离纯化法 吸附柱层析 c. 洗脱