bFGF在局灶性脑缺血再灌注大鼠肝脏中表达的研究论文.docVIP

　　bFGF在局灶性脑缺血再灌注大鼠肝脏中表达的研究论文 李雅娜 孙研 李笑岩 蔡磊 高菲 王伟善 【摘要】 目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast groia reperfusion in rats.Methods Focal cerebral ischemia and reperfusion rat model iddle cerebral artery occlusion by using thread inserting. Reperfusion ia. After 48 hours of the operation, the samples icroscopy. The expression of bFGF munohistochemistry and pared operation. Results The liver cells in model group e of the liver cells occurred fatty changed and inflammatory cells infiltrated of the portal areas. The hepatic sinusoid became narrooperated group. The expression of bFGF odel group than that in Shamoperated group.Conclusion The study indicated that bFGF ote liver tissue repair after cerebral ischemia reperfusion. 【Key ia,reperfusion,liver,bFGF,rats 组织或器官在一定时间缺血缺氧后会造成损伤，血供恢复后损伤会进一步加重称为缺血再灌注损伤（IRI），其中脑缺血再灌注损伤最为常见。脑缺血再灌注损伤是一个复杂的病理生理过程，除导致脑组织病变外，机体多脏器可同时受累，肝脏作为最易受累的器官之一，在临床和实验中受到人们的高度重视，但其机制还不完全清楚［１，２］。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast groi等［４］线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。取直径为0.2 mm、长5 cm的尼龙渔线，一端近火将其烧成直径为0.24 mm的球形，使之变成规格一致、头端光滑的栓线，在距栓线头端18 mm、28 mm的位置以记号笔标记。使用前依次用75%乙醇、肝素钠注射液浸泡。大鼠腹腔注射3.5%水合氯醛(1ml/100g)麻醉后，将其仰卧于手术台上，固定四肢及头部，垫高颈部，取颈部正中切口2 cm，显露左侧胸锁乳突肌，钝性分离左侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉，结扎颈总动脉近心端，并于此结扎线的上方穿线备用，注意避免损伤迷走神经，再结扎颈外动脉，以动脉夹暂时夹闭颈总动脉分叉处，在距动脉夹约1 cm的近心端剪一“V”形小口，将栓线插入，栓线到达动脉夹处时以备用线将其扎住以免滑脱。向外侧轻拉颈外动脉结扎线，栓线沿内上方角度插入，以便顺利进入颈内动脉，避免误入翼腭动脉。栓线前端到达大脑前动脉处遇阻力时止，提示线已阻塞大脑中动脉，此时所做的第一个标记到达颈外动脉和颈内动脉分叉处，第二个标记到达“V”形切口处。剪断多余的结扎线，缝合切口，缺血2 h后轻拔栓线皮肤外的残端，至有阻力时提示线的头端已至颈外动脉，拔出约0.5 cm，实现再灌注。术中及术后环境温度调节在25～30℃左右，密切注意生命体征。 1.4 动物筛选 大鼠麻醉清醒后按Longa等［５］5分制方法进行神经功能评分。0分：无神经损伤症状，活动正常；1分：轻微神经功能缺损，不能完全伸展右侧前肢；2分：中度局灶性神经功能缺损，行走时向右侧转圈；3分：重度局灶性神经功能缺损，行走时向右侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失。其中得分在1～3分者被认为模型制作成功，纳入实验。并设假手术组，仅模拟手术，不阻塞大脑中动脉，每组各10只大鼠。 1.5 肝组织病理学观察 术后48 h，大鼠以3.5%水合氯醛麻醉后，解剖分离肝脏，生理盐水冲净，浸入4%多聚甲醛溶液中固定12 h，修整组织块，PBS冲洗6 h，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，5 μm厚度切片，行HE染色，光镜下观察其组织病理学改变。 1.6 免疫组织化学染色 石蜡切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢溶液37℃ 30 min，蒸馏水冲洗后微波修复；PBS漂洗3次，滴加10%山羊血清封闭液，37℃孵育30 min；滴加兔抗bFGF单克隆抗体(1∶400)，4℃孵育过夜；PBS漂洗3次，滴加生物素化羊抗兔IgG(1∶200)，37℃孵育30 min；PBS漂洗3