cmyc反义寡核苷酸联合5Fu对胃癌的体外及裸鼠体内抗肿瘤作用论文.docVIP

　　cmyc反义寡核苷酸联合5Fu对胃癌的体外及裸鼠体内抗肿瘤作用论文 蔡辉 王晓鹏 苏河 李荣范 马云涛 李振军 【摘要】 目的： 探讨cmyc反义寡核苷酸(ASODN)联合5Fu对胃癌MKN45细胞株的体内、外抗肿瘤作用. 方法： 采用脂质体介导cmyc反义寡核苷酸转染人胃癌细胞系，用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价cmyc ASODN联合5Fu对胃癌细胞增殖的影响；流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和细胞周期；RTPCR及免疫组化方法检测cmyc基因表达变化；建立荷瘤小鼠模型，通过皮下瘤体内注射药物观察肿瘤体积和抑瘤率的变化. 结果： cmyc反义寡核苷酸联合5Fu可显著抑制细胞增殖，细胞凋亡率（23.4±1.9）%，较单用cmyc反义寡核苷酸（10.6±1.1）%和5Fu（12.5±1.0）%的抑制作用更为显著（P 0.01）；RTPCR及免疫组化显示ASODN和5Fu均使cmyc mRNA和蛋白表达下降；体内实验显示cmyc反义寡核苷酸联合5Fu可明显减少肿瘤体积，抑制肿瘤生长，抑瘤率达46.7%；较单一治疗组明显（P 0.05）. 结论： cmyc基因反义寡核苷酸联合5Fu能明显抑制胃癌MKN45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调cmyc蛋白水平；且可有效抑制人胃癌裸鼠皮下肿瘤的生长. 【关键词】 基因，myc；5氟尿嘧啶；寡核苷酸类.freelor effect of cmyc antisense oligonucleotides bined yc antisense oligodeoxynucleotide ediated by liposome. Cell proliferation ined by floetry(FCM). The expression of cmyc gene ethod of immunohistochemistry and RTPCR at the mRNA and protein level respectively. Nude mice tumor models an gastric cancer MKN 45 cells and tumor suppression rate and tumor volume yc antisense oligonucleotides bined arkedly than the rate of cmyc antisense oligonucleotides(10.6±1.1)% or 5fluorouracil(12.5±1.0)% seperately(P 0.01). The tumor volume and the rate of tumor suppression of the bined group reached 46.7% in vivo experiment, munohistochemical and RTPCR assays shoyc antisense oligonucleotides and 5Fu could decrease the expression of cmyc gene. CONCLUSION: Cmyc antisense oligonucleotides bined yc gene expression, induce the apoptosis of MKN45 cells and effectively suppress the groor. It can provide a nea. 【Keyyc; 5fluorouracil; oligonucleotides, antisense; stomach neoplasms; in vitro/in vivo 0引言 原癌基因cmyc的蛋白产物是一种DNA结合的磷酸化蛋白质,是调节细胞生长分化的重要转录激活因子. cmyc基因不仅参与了胃癌的发生，而且在胃癌的发展中亦起重要作用［1］. 5氟尿嘧啶（5Fu）是胃癌化疗的首选药物之一. 国内外对胃癌基因治疗结合化疗的研究较少. 因此，我们研究脂质体介导cmyc ASODN联合5Fu对胃癌MKN45细胞增殖、凋亡、cmyc蛋白表达的影响以及荷瘤裸鼠瘤体生长的影响,为临床治疗胃癌提供一定的依据. 1材料和方法 1.1材料 人低分化胃腺癌MKN45细胞株（上海生物化学和细胞研究所）；脂质体转染试剂LipofectamineTM2000（美国Invitrogen公司）；MTT(美国BIB公司)，DMEM培养基（Gibco公司）；鼠抗人cmyc一抗、生物素化山羊抗鼠IgG（II抗），DAB显色试剂盒（福