原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
油菜基因的克隆
本实验是在前期分子标记定位基因的基础上对引起相关表型变异的基因进行分子生物学研究，以明确引起表型变异的原因，为提高油菜产量做出贡献。 突变体油菜叶、茎、花、蕾 提取叶片DNA 依据已测序生物中的同源基因设计3条引物 PCR扩增 PCR产物克隆进pMD19-T载体，然后测序 序列拼接，得到几种候选序列，并进行翻译 BLAST比对搜索同源基因，把翻译出来的蛋白质序列进行Clustal比对 分析比对结果，初步判断基因序列的变异，特别是保守区域的变异 提取RNA，反转录 依据得到的DNA序列设计引物 RT-PCR PCR产物克隆进pMD19-T载体，然后测序 序列拼接，得到几种候选序列，并进行翻译 BLAST比对搜索同源基因，把翻译出来的蛋白质序列进行Clustal比对 分析比对结果，确定基因序列的变异，特别是保守区域 功能域预测，亚细胞定位 取同一生长时期的油菜叶、茎、花、蕾，迅速在液氮下冷冻，然后放于-80 ℃下待用 提取RNA，反转录 设计特异性引物 RT-PCR 分析表达情况 设计引物 PCR扩增得到包括启动子、ORF、3’端保守序列在内的全长基因序列 双酶切连接进入双元载体，筛选，通过农杆菌介导的浸染花芽的方法转入拟南芥以及野生型油菜培养 观察表型变化情况 通过构建干扰载体，进行转基因研究，抑制基因表达，观察突变体表型变化情况。 Thank you!
文档评论（0）