实时荧光定量PCR技术-全面课案.ppt

RNA标准曲线 精密度差 精密度高 精密度低 40次相同的重复 3次相同的重复 精密度低的原因 加样误差 操作、移液器、反应液未混匀 体系配置方法 低拷贝数的样品（泊松分布） 没有使用ROX校准 扩增曲线异常—平台期低 样品浓度？ 引物二聚体或浓度？ 扩增曲线异常—指数增长期异常 无指数增长期或指数增长期较短 扩增曲线异常—曲线不光滑 扩增时间开始较晚，定量不准确 标准曲线评价 评价标准曲线： 扩增效率(E) ---90%-110% 相关系数(R2) ---大于0.99 平行管重复性 ---SD小于0.167 标准曲线差 可能的影响因素 稀释精度 加样精度 反应体系的优化 模板降解 定量PCR的新运用 等位基因分型（SNP研究) MicroRNA分析 基因拷贝数（CNV)分析 蛋白质分析 * * 常规PCR重要的是终产物的定性分析，虽然有些能够根据中产物半定量，