SLE病人及其子代与SLE相关基因及抗体关系研究论文.docVIP

　　SLE病人及其子代与SLE相关基因及抗体关系研究论文 孙焕霞 苏厚恒 崔佳佳 李光文 【摘要】 目的 探讨缓解期系统性红斑狼疮(SLE)病人所生子女罹患SLE的危险性。方法 应用实时定量PCR技术检测14例SLE病人、病人子女及18例对照者HLADRB1*1501、DRB1*0301、DQA1*0102、DQB1*0602的频率，免疫印迹法检测入组者ENA抗体谱。结果 SLE病人组DQA1*0102频率显著高于对照组(RR=2.02,P 0.05)，而两组间DRB1*1501、DRB1*0301、DQB1*0602频率比较差异无显著意义(P 0.05);SLE病人组 DQB1*0602频率显著高于其子女组(RR=2.06,P 0.05)，而两组间DRB1*1501、DRB1*0301、DQA1*0102频率比较差异无显著性(P 0.05);SLE子女组DQA1*0102频率显著高于对照组(RR=2.14，P 0.05);而两组间DRB1*1501、DRB1*0301、DQB1*0602频率比较差异无显著性(P 0.05)。SLE病人组自身抗体SSA及dsDNA出现频率明显高于对照组(P=0.019、0.015)，两组间SSB及Ro52差异无显著性(P 0.05); SLE病人子女组所测自身抗体检出率为0。结论 HLADQA1*0102为SLE的易感等位基因，DQA1*0102有一定的遗传倾向。经过系统治疗达到缓解期的SLE病人生育的子女罹患SLE的危险性无明显增加趋势。 【关键词】 红斑狼疮,系统性;HLA抗原;疾病遗传易感性;等位基因 ABSTRACT Objective To explore the risk of suffering from systemic lupus erythematosus (SLE) in children born by patients asis. Methods The frequencies of HLADRB1*1501, DRB1*0301, DQA1*0102 and DQB1*0602 alleles of 14 SLE patients and their children, and 20 healthy controls e PCR technology and ENA antibody repertoire by immunoblotting. Results In SLE group, the frequency of DQA1*0102 allele in terms of DRB1*1501, DRB1*0301, DQA1* 0102 allele (P 0.05). In SLEchildren group, DQA1*0102 allele frequency atic therapy, is not increased. KEY Genomic DNA提取试剂盒,按操作步骤提取上述实验对象全血DNA,置4 ℃保存，备用。 1.2.2 PCR 扩增 采用实时定量PCR技术检测所有入组者的HLADRB1*1501、DRB1*0301、DQA1*0102、DQB1*0602等位基因。目的基因引物序列见表1，各对引物分别特异性扩增等位基因 HLADRB1*1501、DQA1* 0102、DQB1*0602、DRB1*0301。另外，设计一对上下游引物βaction作为内参照引物,以检测扩增体系。表1 HLADRB1*1501、DQA1* 0102、DQB1*0602、DRB1*0301引物序列等位基因引物序列 引物源于Cell Mol Neurobiol2，引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司设计合成。 PCR反应体系20 μL,各反应体系均含有以下组分：带有Rox的Platinum SYBR Green qPCR Super MixUDG 10 μL，10 μmol/L正向引物(F)1 μL, 10 μmol/L 反向引物(R)1 μL,模板DNA2 μL,高压灭菌蒸馏水6 μL。三步循环法PCR 扩增条件: 预先50 ℃ UDG 孵育2 min，95 ℃预变性2 min;然后95℃变性15 s，退火温度退火45 s,72 ℃延伸30 s，共进行35个循环，最后4 ℃保存。HLADRB1*0301、DRB1*1501、DQA1*0102、DQB1*0602基因退火温度分别为56.7 ℃、62.3 ℃、58.4 ℃、62.3 ℃。研究对象部分PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测等位基因扩增情况。 1.2.3 自身抗体ENA谱的检测 采用免疫印迹法检测所有研究对象自身抗体ENA谱。 1.3 统计学处理 基