三七皂甙单体Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞线粒体功能影响的研究论文.docVIP

　　三七皂甙单体Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞线粒体功能影响的研究论文 李伟文，方传勤，陆松敏，刘建仓，郭素清，程凤，王正国 【摘要】 目的 观察三七皂甙单体Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞线粒体细胞色素氧化酶（COX）活性及膜电位的影响。方法 健康ethods Torrhagic shock group(n=6),simple resuscitation group(n=6),and resuscitation plus Rg1 treatment group(n=6).COX activity ined by ultraviolet spectrophotometer,and mitochondrial membrane potential(MMP) by fluorospectrophotometry.Results The COX activity arkedly in hemorrhagic shock group pared ore remarkably after treatment by PNS Rg1 pared itochondrial membrane potential(MMP) ore markedly in 5 hour hemorrhagic shock group pared ore markedly after treatment by PNS Rg1 and then came back to normal level.The MMP increased higher in resuscitation group pared itochondrial COX activity and membrane potential can be increased markedly after treatment by PNS Rg1 pared orrhagic shock group. PNS Rg1 may improve COX activity by increasing its production and quality. 【Key orrhagic shock;intestinal epithelial cells；panax notoginseng saponins Rg1；cytochrome oxidase；mitochondrial membrane potential 能量代谢障碍，线粒体损伤是休克的重要成因。失血性休克后缺血低氧能使线粒体电子传递链上细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase，COX）活性显著降低,线粒体呼吸功能也进行性下降。三七皂甙单体Rg1能显著提高失血性休克大鼠的存活率，使受损线粒体功能形态明显恢复，并能上调COXⅠ和COXⅡ基因的表达［1］。本实验观察Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞线粒体COX活性及膜电位的影响，为Rg1在失血性休克时保护线粒体的作用机制及缺血低氧性线粒体损伤的防治药物的研究提供理论基础。 材料与方法 1 动物分组与模型制作［2］ 健康M），产地涿州。 2.2 主要试剂及其配制 肠上皮细胞线粒体分离液：临用前配制，取蔗糖85.575g,Tris 1.2114g,.freell水中，调节pH值至7.6,定容至1 000ml，保存于4℃。 肠上皮细胞线粒体反应递质（225mmol/L蔗糖，20mmol/L KCl， 5mmol/L MgCl2，10mmol/L K2HPO4/KH2PO4，10mmol/L TrisHCl，1mmol/L EGTA，pH7.4）；称取0.7701g蔗糖、0.1864g KCl、0.0474g MgCl2、0.1576g TrisHCl、0.2282g K2HPO4、0.136g KH2PO4、0.0380g EGTA、0.1g BSA,加双蒸水（ddH2O）溶解，调pH7.5,定容至100ml,保存于4℃。临用时加入鱼藤酮,使其浓度为5μmol/L，加入琥珀酸钠,使其浓度为5mmol/L。 鱼藤酮、琥珀酸钠、细胞色素C及罗丹明123（Rhodamine 123）购自Sigma公司。 3 线粒体制备 按文献所述方法并改进。用差速离心法获得线粒体。将线粒体悬浮在1.5ml分离递质中,卡马氏兰法测定蛋白含量,使蛋白浓度为5mg/ml，用来测量线粒体膜电位；再将线粒体蛋白浓度调整为1mg/ml测量COX活性。以上操作均在0～4℃，2小时内完成。 4 线粒体膜电位的检测 根据文献［2］略有改进，以阳离子荧光染料Rhodamine123为探针，通过线粒体摄取Rhodamine123后所引起递质中荧光值的变化来反映线粒体膜电位。步骤如下：肠黏膜细