生物催化剂的发现.ppt

复筛 培养与发酵 （1）试管培养 试管摇床培养。常用。 目的：原种斜面培养后，为了提高初筛效率。 （2）摇瓶培养（摇瓶发酵） 250或500ml锥形瓶再200rpm摇床上培养。 目的：培养基和培养条件的初筛。 培养与发酵 （3）玻璃自控发酵罐 容量5～50L。是摇床向发酵罐的过渡阶段。 目的：工艺参数、工艺条件的选择和考察。 （4）试验罐培养 中间工业试验阶段 目的：放大和验证摇床试验结果，积累发酵工艺规 律和发酵参数。为工业规模生产打基础 培养与发酵 （5）发酵试验的三个阶段 2.2.2 从极端微生物中筛选极端酶的策略 极端酶（extremozyme） 是由极端微生物（extremophile）产生的酶，与之相对应的中间型是常态微生物（mesophilic organism）产生的酶。 如何进行极端酶的研究和开发 ①必须有足够的酶，这就涉及极端微生物的培养 ②依赖极端酶在中间宿主中的表达 极端环境中的微生物 极端环境：高等动植物不能生长，大多数微生物 不能生活的高温、低温、强碱、强酸、高盐、高压、高辐射、等特殊环境。 ◆1 种类：极端嗜热菌，最适生长温度90～105℃，高达110℃ 极端嗜冷菌，可在零下70～80摄氏度度生长。 极端嗜盐菌，新疆盐湖中的可耐受20～30％的NaCl 极端嗜碱菌，PH 9～10 极端嗜压菌，在深海底，生活压力7.1～8.1×107Pa ◆3 应用 开采石油：嗜压菌产气增压降低原油粘度。 生产特殊酶制剂：嗜碱细菌产生的蛋白酶作为洗 涤剂的添加剂 环境保护：嗜碱芽孢杆菌产生的木聚糖酶能够水解 木聚糖产生木糖和寡聚糖，可用来处理人造纤维废物 遗传工程以及基因技术：从水生栖热菌中提取耐 热的Taq DNA聚合酶 ◆2 特性 都为古细菌。具有不同于一般微生物底遗传机制、 特殊底细胞结构和生理功能。 表2-1 某些有应用前景的超级嗜高温酶 酶 功 能 酶活力的最适温度/℃ 葡萄糖异构酶 葡萄糖→果糖，生产高果糖糖浆 95 木聚糖酶 木浆和纸生产中水解木聚糖 105 α-淀粉酶 淀粉水解 85~90 纤维二糖水解酶 纤维素水解 105 β-葡聚糖酶A，β-葡聚糖酶B 纤维素水解 95 β-甘露聚糖酶 甘露聚糖水解 92 α-半乳糖苷酶 半乳甘露聚糖水解 100~105 β-葡萄糖苷酶 纤维二糖水解 105 β-木糖苷酶 木二糖水解 未 定 β-半乳糖苷酶 乳糖水解 80 2.2.3 未培养生物催化剂的发现策略 未培养微生物（uncultured microorganism） 美国微生物学家Colwell的实验室在1982年首先提出“不能培养微生物（nonculturable microorganism）” 的概念，他们发现快速生长的霍乱弧菌和大肠杆菌移植到无营养料的盐水中，经长时期的低温保存后，细胞数不减，代谢活力不变，但在正常肉汤培养条件下不产生菌落，因此他们用“活的但不能培养（viable but nonculturable, VBNC)”一语描述这种潜伏状态的细菌。 2.3 微生物和酶的一般筛选方法 2.3.1从自然界发现产酶微生物 采样 富集培养：是根据微生物的生理特点，在目的微生物含量较少时，设计一种选择型培养基，创造有利的生长条件，是目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣种变成人工环境下的优势种。分为分批式（摇瓶培养）和恒化式（连续培养）两种不同的方式。 分离 筛选 图2-2 从自然界发现产酶微生物的方法 2.3.2 生物催化剂的高效筛选 高通量筛选（high-through screening, HTS）是近年来发展起来的一种新型筛选技术，其特点是微量、快速、灵敏、准确，在短时间内可以检测大量的微生物。 2.4 优良菌种选育 优良生产菌种应该具备的基本特点： ①生产菌种应该具备在较短的发酵周期内产生大量发酵物 ②在发酵过程中不产生或少产生与目标产品性质相近的反应产物或副产物，以便于分离纯化。 ③能利用多种来源的原材料