毛细管电泳-光结合微透析取样技术对丙二醛(MDA)含量进行实时、在体检测.pptVIP

Detection of malondialdehyde in vivo using microdialysis sampli-ng with CE-?uorescence 毛细管电泳-荧光结合微透析取样技术对丙二醛（MDA）含量进行实时、在体检测 主要内容 一、研究背景介绍 二、仪器试剂 三、实验方法 四、实验结果讨论 五、文献优点缺点 1、研究背景介绍 丙二醛（Malomdialdehvde，MDA）是机体内的氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，形成的脂质过氧化物，它的浓度可以反映脂质过氧化程度。 MDA从膜上产生的位置释放出后，可以与蛋白质、核酸反应，从而丧失功能，还可使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成，对机体造成损害甚至死亡。因此，MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。 对MDA的准确测定可指导人们对机体的受损程度或耐受程度进行正确的评价，有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。 丙二醛(MDA)传统的测定方法是在酸性和高温条件下，与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5-三甲基恶唑2，4-二酮)。而三甲川于532nm处有最大吸收峰来进行测定的。这种方式常常受到多种物质不同程度的干扰。其中最主要的干扰因素是组织内的可溶性糖。 现有测定MDA 的方法 用于MDA 测定已有几种方法： 〔1〕分光光度法。分光光度法灵敏度较低； 〔2〕荧光法。已报道的荧光法由于萃取溶剂不同或按照原文献方法无混匀器使萃取不完全而造成结果不准确； 〔3〕高效液相色谱法。高效液相色谱法需昂贵仪器。 〔4〕比色法。检测方法常受到多种因素的干扰，尤其是当试样处于特殊的情况下，机体内可能会积累很多的干扰物质。 基于以上方法的不足，本文提出了利用毛细管电泳-荧光方法结合微透析技术对丙二醛（MDA）含量进行实时、在体检测的方法。 什么是微透析取样？ 微透析(Microdialysis)技术是一种将灌流取样和透析技术结合起来并逐渐完善的一种从生物活体内进行动态微量生化取样的新技术。 在体微透析取样技术有别于传统的生物采样方法，能够在不明显损伤动物或人体组织的情况下，实现长时间连续取样，与分析仪器联用，可对微量样品实现实时分析。 它具有活体连续取样、动态观察、定量分析、采样量小、组织损伤轻等特点。 微透析取样的原理 基本原理： 在体微透析技术是在组织中植入半透膜探头 (probe)装置,体外微量泵使灌流液(perfusate)流 经探头,组织中被测物质沿浓度梯度差逆向扩散进 入灌流液,并达到一种动态平衡,通过测定流出液, 即透析液(dialysate)中待测物的浓度(Ces),研究 组织细胞外液(extracelluar fluid, ECF)中待测 物的水平(Cos)及其变化过程。 探针 局部图 微透析系统组成 微透析系统一般由微透析探针、连接管、收集器、灌流液和微量注射泵组成。微透析探针是核心部件，由透析膜（管）与入液管和出液管连接而成，探针前端是多碳聚合物半透膜（聚丙烯腈，PAN），透析分子极限为6－100kda，多为20kda。灌流液多为生理盐水、林格氏液和人造脑脊液。 微透析装置示意图 组成部件 微透析实际装置 微透析取样可以与许多检测技术联用。包括以分离为基础的检测技术如高效液相色谱和毛细管电泳，以非分离为基础的技术，如生物传感器、免疫学检测和质谱。因为高效液相色谱有高选择性、易自动化等特点,微透析技术与高效液相色谱联用较多,但是液相色谱存在需要的样品量多，分析时间长，得到的时间分辨率不高，成本较高等缺点，使其应用受到一定的限制。 毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE），是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。 CE具有不同于传统色谱的分离机制，它具有分辨率高、分离速度快、所需样品量少、样品处理相对简便的优点，为与微透析技术联用提供了理想的条件。 2、仪器设备 1.Beckman-Coulter P/ACE MDQ型毛细管电泳仪 2.未处理石英毛细管柱：55cm×75μm（i.d.） 3.微透析探针(MicroLumen, Tampa, FL, USA) 4.KH-1微透析注射泵及控制装置 5.离子阱质谱仪(Thermo Scient