人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究论文.docVIP

人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究论文.doc

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人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究论文.doc

  人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究论文 【摘要】 本研究通过体外实验探讨人可溶性血管内皮生长因子受体1(sFLT1)对白血病细胞增殖的抑制作用。用RTPCR检测白血病细胞株K562、HL60、U937和骨髓LTCIC VEGF mRNA、VEGFR1(FLT1) mRNA的表达,用流式细胞术检测上述细胞VEGF和VEGFR1(FLT1)的表达,ELISA法检测细胞培养上清中VEGF的含量,将sFLT1加入 K562、HL60白血病细胞株和骨髓LTCIC培养体系中,应用MTT法计算细胞生长的抑制率。结果显示:白血病细胞株K562、HL60、U937和骨髓LTCIC均表达VEGF,以K562表达VEGF量最高。K562和HL60细胞株还表达FLT1,U937细胞和骨髓LTCIC表达的FLT1表达量很低。sFLT1明显抑制白血病细胞株K562及HL60的生长,并且随着sFLT1浓度的增加.freelic Cell Proliferation by Human Soluble VEGFR1 Abstract The current study an soluble vascular endothelial groic cells in vitro. Reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RTPCR) RNA and VEGFR1(FLT1) mRNA in K562, HL60, U937 leukemic cell lines and bone marroetry entioned cells. VEGF concentrations in the cell culture supernatants ined by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). Cell proliferation ined by MTT after adding sFLT1 to K562, HL60 and LTCIC culture system. The result shoic cell lines and LTCIC, especially K562, K562 and HL60 cell lines also expressed FLT1, but a little expression anner. The highest inhibition rate e leukemic cell lines, and the inhibition effect enhances as the concentration of the sFLT1 increase, but sFLT 1 not influence the proliferation of normal marroic cell 近年来越来越多的证据表明,血管内皮生长因子(VEGF)与白血病的发生、发展、演变及预后相关,它可以促进白血病细胞的生长、增殖和转移。因此以VEGF为靶点治疗白血病已受到人们的广泛关注,目前许多研究集中于抗VEGF单克隆抗体,VEGF受体抑制剂[1,2],反义寡核苷酸[3-5]等制剂的研究。然而,这些制剂均非内生性VEGF抑制剂, sFLT1是内生的VEGF受体的拮抗剂,可特异性地与VEGF相结合,从而抑制VEGF的生物学活性[6,7]。 sFLT1能抑制VEGF所引起的白血病细胞的增殖,但目前对于sFLT1的研究尚处于探索阶段,本研究以表达VEGF及其受体的白血病细胞株为研究对象,观察sFLT1对白血病细胞株及正常造血细胞的影响。 材料和方法 试剂 RPMI 1640培养液、IMDM为Gibco产品;胎牛血清、马血清、TRIZOL、DNA marker、琼脂糖、MTT均购自北京鼎国生物试剂公司;AMV逆转录酶为Promega产品,dNTPs、Oligo d(T)、Taq酶为TaKaRa产品;VEGF ELISA试剂盒、sFLT1冻干粉购自北京晶美公司;VEGF单克隆抗体、VEGFR1单克隆抗体购自美国R&D公司。 白血病细胞 CML急性变白血病细胞株K562、人早幼粒细胞白血病细胞系HL60,人单核细胞白血病细胞株U937为吉林大学第一医院血液肿瘤科实验室保存株。3种细胞在含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中,于37℃、 5% CO2、饱和湿度条件下常规培养,3-4天传代1次。 骨髓长期培养起始细胞(LTCIC) 取健康成年人抗凝骨髓5 ml,按常规分离骨髓单个核细胞,以含12。5%胎牛血清、12.5%马血清的IMDM 4 ml重悬细胞

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