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人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究论文.doc
人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究论文
【摘要】 本研究通过体外实验探讨人可溶性血管内皮生长因子受体1(sFLT1)对白血病细胞增殖的抑制作用。用RTPCR检测白血病细胞株K562、HL60、U937和骨髓LTCIC VEGF mRNA、VEGFR1(FLT1) mRNA的表达,用流式细胞术检测上述细胞VEGF和VEGFR1(FLT1)的表达,ELISA法检测细胞培养上清中VEGF的含量,将sFLT1加入 K562、HL60白血病细胞株和骨髓LTCIC培养体系中,应用MTT法计算细胞生长的抑制率。结果显示:白血病细胞株K562、HL60、U937和骨髓LTCIC均表达VEGF,以K562表达VEGF量最高。K562和HL60细胞株还表达FLT1,U937细胞和骨髓LTCIC表达的FLT1表达量很低。sFLT1明显抑制白血病细胞株K562及HL60的生长,并且随着sFLT1浓度的增加.freelic Cell Proliferation by Human Soluble VEGFR1
Abstract The current study an soluble vascular endothelial groic cells in vitro. Reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RTPCR) RNA and VEGFR1(FLT1) mRNA in K562, HL60, U937 leukemic cell lines and bone marroetry entioned cells. VEGF concentrations in the cell culture supernatants ined by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). Cell proliferation ined by MTT after adding sFLT1 to K562, HL60 and LTCIC culture system. The result shoic cell lines and LTCIC, especially K562, K562 and HL60 cell lines also expressed FLT1, but a little expression anner. The highest inhibition rate e leukemic cell lines, and the inhibition effect enhances as the concentration of the sFLT1 increase, but sFLT 1 not influence the proliferation of normal marroic cell
近年来越来越多的证据表明,血管内皮生长因子(VEGF)与白血病的发生、发展、演变及预后相关,它可以促进白血病细胞的生长、增殖和转移。因此以VEGF为靶点治疗白血病已受到人们的广泛关注,目前许多研究集中于抗VEGF单克隆抗体,VEGF受体抑制剂[1,2],反义寡核苷酸[3-5]等制剂的研究。然而,这些制剂均非内生性VEGF抑制剂, sFLT1是内生的VEGF受体的拮抗剂,可特异性地与VEGF相结合,从而抑制VEGF的生物学活性[6,7]。 sFLT1能抑制VEGF所引起的白血病细胞的增殖,但目前对于sFLT1的研究尚处于探索阶段,本研究以表达VEGF及其受体的白血病细胞株为研究对象,观察sFLT1对白血病细胞株及正常造血细胞的影响。
材料和方法
试剂
RPMI 1640培养液、IMDM为Gibco产品;胎牛血清、马血清、TRIZOL、DNA marker、琼脂糖、MTT均购自北京鼎国生物试剂公司;AMV逆转录酶为Promega产品,dNTPs、Oligo d(T)、Taq酶为TaKaRa产品;VEGF ELISA试剂盒、sFLT1冻干粉购自北京晶美公司;VEGF单克隆抗体、VEGFR1单克隆抗体购自美国R&D公司。
白血病细胞 CML急性变白血病细胞株K562、人早幼粒细胞白血病细胞系HL60,人单核细胞白血病细胞株U937为吉林大学第一医院血液肿瘤科实验室保存株。3种细胞在含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中,于37℃、 5% CO2、饱和湿度条件下常规培养,3-4天传代1次。
骨髓长期培养起始细胞(LTCIC) 取健康成年人抗凝骨髓5 ml,按常规分离骨髓单个核细胞,以含12。5%胎牛血清、12.5%马血清的IMDM 4 ml重悬细胞
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