人宫颈癌组织放射治疗后原癌基因c┐fos的表达论文.docVIP

　　人宫颈癌组织放射治疗后原癌基因c┐fos的表达论文 .freels;radiotherapy Abstract:AIM To investigate changes of c-fos oncogene ex-pression in the human cervical cancer follo pa-tients diagnosed ous cervical cancer，in munohistochemical stain-ing ed for Fos protein in formalin-fixed freezing sections.RESULTS The majority of cancer cells shomunoreactivity（Fos-IR）before irradiation.Follomunoreactivity decreased re-markably（P 0.01），and Fos-immunopositive staining ost of cancer cells.No obvious change in Fos-immunoreactivity，hoesenchymal connective tissue folloay be regarded as a molecular marker for valuing the cancer cell proliferation during radiotherapy of human cervical cancer. 0 引言 宫颈癌是人类多发性恶性肿瘤，严重危害中、老年女性的健康.放射治疗对宫颈癌具有明确有效的治疗效果.因此，探讨宫颈癌的放射生物学机制，如在细胞分子水平的变化规律，对于提高肿瘤的整体放射水平可能具有重要的借鉴意义.研究表明Fos在宫颈癌组织中有表达 ［1，2］ ，但它是否能反映放疗对癌细胞的增殖状态，目前还未见报道.因此我们利用免疫组织化学方法，探讨了放射治疗中宫颈癌组织Fos的变化及其意义. 1 材料和方法 1.1 材料 宫颈癌活检组织标本18例（n=18），取自临床病理诊断为磷状细胞癌患者，病理分级为Ⅰ～Ⅱ.年龄36～56岁.其中，放疗前标本8例，放疗后标本10例.接受放射治疗的患者分别为15～20次（30～40Gy）.宫颈癌活检组织标本，入40g L-1 多聚甲醛，0.1mol L-1 磷酸缓冲液（PB，pH7.4），4℃下固定24～48h，然后换入30g L-1 蔗糖溶液内，4℃下过夜.冰冻连续冠状切片，切片厚10μm，切片按顺序分为数套，置于-20℃保存备用.染色前将切片晾干，然后分别作常规HE染色、Fos免疫组化染色和对照染色. 1.2 方法 切片于10mmol L-1 PBS内洗10min，再入含0.3mL L-1 过氧化氢溶液内处理30min，用以灭活内源性过氧化物酶.经PBS洗后，入兔抗Fos多克隆抗体（1 5000，CALBIOCHEM，用含2mL L-1 正常山羊血清和0.1mL L-1 Triton X-100的PBS稀释，1 100）内，于4℃下孵育48h.然后入bi-otin标记的羊抗兔IgG（1 200，Vector公司）溶液内，室温下放置4h.入ABC复合物（1 200，Vector公司产品）溶液，室温下孵育2h.每次抗体孵育后均用PBS洗，3×10min.最后入DAB/H2 O 2 溶液（0.05g L-1 /0.01g L-1 ）反应10min.另外，用正常小鼠血清溶液代替特异性第一抗体孵育切片，作为免疫染色对照. 1.3 半定量分析 参照以往文献中的定量方法［4］ ，对Fos免疫染色阳性细胞进行半定量分析.在放疗前和放疗后活检组织10μm切片（10张/例）上，随机选取一高倍视野，计数单位面积（62500μm2 ）阳性细胞数目.统计学处理:比较放射治疗前与放射治疗后两组的Fos免疫阳性胞体细胞数目x ±s，进行单因素χ2检验. 2 结果 在HE常规染色的切片上，放疗前的宫颈组织可见大量的癌细胞分布，癌细胞呈卵圆形或不规则型，癌细胞增殖旺盛，可见病理性核分裂像.镜下视野多为癌细胞占据，间质较少（Fig1（略））.经15～20次（30～40Gy）的照射后，癌组织明显减少，少数残留的癌细胞呈巢状分布，其间为丰富的间质结缔组织增生，间质内可见大量的白细胞浸润（Fig2（略））. 2.1 Fos免疫反应产物的形态特征 在应用特异性第一抗体孵育的切片上，Fos的免疫反应阳性产物呈深棕色，主要定位于细胞核内，部分产物弥散分布在细胞核膜或核周.在用正常血清取代特异性第一抗体进行孵育的切片上，未见到Fos的阳性染色.