人脐带静脉灌注液间充质干细胞的分离和鉴定论文.docVIP

　　人脐带静脉灌注液间充质干细胞的分离和鉴定论文 刘晓丹，刘兵，李秀森，毛宁 【摘要】 本研究旨在探讨人脐带静脉灌注液中是否存在间充质干细胞及其分离和扩增方法。从正常产妇分娩后的脐带静脉灌注液分离间充质干细胞，观察细胞形态并用流式细胞仪分析其细胞表型和细胞周期，在体外分别诱导其成骨、成脂肪和成软骨细胞分化。结果表明：脐带静脉灌注液来源的间充质干细胞为成纤维细胞样，高表达CD29、HLAABC、CD166、CD105、CD73、CD44；不表达造血和内皮标志（CD34、CD45、CD144和CD14）。它们可向骨、脂肪和软骨细胞分化，符合间充质干细胞的基本功能特征。结论：人脐带静脉灌注液存在间充质干细胞.freelal Stem Cells from Perfusion of Human Umbilical Cord Vein Abstract This study ed to investigate esenchymal stem cells (MSCs) existed in human umbilical cord vein and to establish the methods of isolation and expansion in vitro. The MSCs direved for perfusion of umbilical cord vein (UVMSCs) en. The morphology of MSCs and their differentiation potential into osteoblast, adipocyte and chondrocyte ined by using floetry. The result shoesenchymal stem cells separated from umbilical cord vein gave rise to a population of adherent cells orphology. Similarly to bone marroatopoietic and endothelial markers (CD45, CD34, CD14 and CD144). Functionally, they could differentiate into the osteoblast, adipocyte and chondrocyte. It is concluded that MSCs exist in the human umbilical cord vein perfusion. Their read amplification in vitro contribute to clinical applications for cell therapy and tissue engineering. Key esenchymal stem cell; umbilical cord vein perfusion; cell isolation; cell identification 间充质干细胞（mensenchymal stem cells, MSC）最早自骨髓中分离，是一类具有自我更新及多向分化潜能的 中胚层源干细胞［1］。作为多种骨髓基质的前体细胞，MSC能通过调节造血微环境以促进造血干细胞增殖、分化，它亦能调节淋巴细胞免疫功能，从而减轻移植排斥反应等生物学效应［2］。MSC的发现为针对性解决造血干细胞移植，尤其是脐血移植中的干细胞数量相对不足及减轻移植物抗宿主病提供了一个有效手段［3，4］。然而，临床上骨髓取材困难，供体有限，随年龄的增加其增殖和分化能力下降，且有病毒污染的可能［5］ 。因此，寻找MSC的新来源具有重要意义。本研究从易于获取、且组织来源较为原始的脐带静脉灌注液中寻找MSC（UVMSC），并对其进行生物学特性的鉴定。 材料和方法 材料与试剂 脐带来自北京市中西医结合医院正常分娩产妇，均经父母授权同意。Ⅳ胶原酶为Sigma公司产品，αDMEM为Hyclone公司产品，胎牛血清为FBS，Stem Cell产品，L谷氨酰胺为Amresco公司产品，EGF为Peprotech公司产品，rhVEGF为R D公司产品，bFGF为双鹭药业公司产品，胰蛋白酶为Amresco公司产品，诱导试剂：地塞米松、β甘油磷酸钠、抗坏血酸磷酸盐、3异丁酸1甲基黄嘌呤（IBMX），胰岛素、消炎痛、丙酮酸钠均为Sigma公司产品，TGFβ3为R D公司产品，ITSA为Sigma公司产品；流式相关鼠抗人单克隆抗体：CD29PE、CD166PE、 CD14、CD144PE、CD34FITC、CD45FIT