人脐血间充质干细胞抑制异体T淋巴细胞反应的实验及临床意义论文.docVIP

　　人脐血间充质干细胞抑制异体T淋巴细胞反应的实验及临床意义论文 王茜，杨琨，白海， 吴涛， 路继红 【摘要】 目的： 研究人脐血间充质干细胞(MSCs)对异体外周血T淋巴细胞抑制的影响. 方法：分离、扩增脐血MSCs，流式细胞术检测表面标志以鉴定. 取分离培养的脐血MSCs，与经分离的异体淋巴细胞共培养，在植物血凝素（PHA）刺激下.freelan umbilical cord bloodderived mesenchymal stem cells (MSCs) on peripheral blood T lymphocytes. METHODS: MSCs normal human umbilical cord blood, cultured in vitro, purified and then identified by examining surface marker phocytes allogenic peripheral blood and identified phocytes phocyte proliferation easured by using MTT reduction method and the effect of MSCs on the T lymphocyte transformation stimulated by PHA an umbilical cord bloodderived MSCs inhibited T lymphocyte proliferation and PHA induced lymphocyte transformation. The secretion of IFNγ in supernatant an umbilical cord bloodderived MSCs can inhibit the immune response of allogenic T lymphocytes and alleviate the grafeversushost diseases. 【Keyesenchymal stem cells; peripheral blood Tlymphocytes; phytohemagglutinins; interferon TypeⅡ; interleukin 4; 0 引言 间充质干细胞(mesenchymalstem cell, MSCs) 成为目前倍受关注的一类多能干细胞. 人脐血中除含有丰富的造血干细胞，还存在一类不同于造血干细胞的原始细胞，在合适的条件下可以向成骨细胞和脂肪细胞分化，甚至跨系向神经元细胞分化［1］，表现出较强的多向分化潜能. 脐血MSCs可从脐血、胎盘、羊水、脐静脉内皮下层、外周等组织中分离［2-3］，与骨髓MSCs相比，脐血MSCs具有来源丰富、取材方便、移植排斥反应轻微和外源性污染少等优点，因而具有更大的研究价值和应用潜能. MSCs除具有支持体外造血、促进体内造血重建功能外，还具有抑制同种异体免疫反应，降低移植物抗宿主反应的作用. 体内实验表明，器官移植时输注MSCs可减轻排斥反应和延长移植物生存时间. 我们试图通过研究人脐血MSCs对异体外周血T淋巴细胞的影响，进一步探讨MSCs的免疫调控机制，为脐血MSCs的应用提供实验依据. 1 材料和方法 1.1 材料 RPMI1640培养基(华美公司)；淋巴细胞分离液（华美公司）；抗CD13，CD44，CD71，CD166，CD34，CD45，CD3，CD4，CD8荧光抗体（晶美公司）. 1.2 方法 1.2.1 脐血MSCs的分离和培养无菌条件 取脐带血30 mL，肝素抗凝. 用PBS平衡盐溶液稀释混匀，Percoll淋巴细胞分离液1500 r/min离心20 min，吸取界面单个核细胞，LGDMEM培养液，1000 r/min离心3 min，洗涤2次. 显微镜下记数，按1×106/cm2密度分别接种于25T塑料培养瓶，37℃, 5 mL/L CO2孵箱中培养48 h. 更换培养液，弃去未贴壁的细胞，每3 d半量换液1次. 待细胞达到80%～90%融合，消化、记数. 然后进行传代接种培养，记为P1代. 再传代培养记为P2代，取P3~P5代进行实验. 1.2.2 细胞表面分子测定 取密度为1×109/L单细胞悬液，与抗CD13, CD44, CD71, CD166, CD34, CD45荧光标记抗体室温反应30 min，洗涤、固定，流式细胞仪检测. 1.2.3 外周血T淋巴细胞分离、鉴定 取肝素抗凝新鲜外周血用PBS倍比稀释后，用淋巴细胞分离液(Ficoll，1.077 g/L)分离