RNA干涉ZmCoA基因对玉米秸秆木质素含量及组分影响的研究.pdf

摘 要 摘 要 摘摘 要要 玉米 (ZeaMaysL.) 秸秆的主要成分是木质素和纤维素。木质素主要沉积在 维管植物的细胞壁中，有增强机械耐受强度和疏导水分的作用。由于木质素结构 较复杂，在生产中很难被有效利用，对牧草质量、纸张制造及生物燃料生产具有 负面效应。因此利用基因工程手段，在分子水平上调节木质素的生物合成，在不 影响植物正常生长的前提下，降低木质素的含量或改变其组分具有重要的意义。 该文以玉米 B73 为植物材料，利用 RNAi 技术，围绕木质素合成关键酶咖啡酸-O- 甲基转移酶 (COMT )、咖啡酰辅酶 A-O-甲基转移酶 (CCoAOMT) 的基因，构建 干涉表达载体，开展农杆菌介导的玉米茎尖遗传转化，并对转化植株进行筛选， 同时对转 CoA基因的植株进行分子检测和木质素含量检测，取得如下主要结果： 1、采用改良的 CTAB 法提取玉米 B73的基因组 DNA，利用 PCR 技术克隆得 到 COMT基因和 CoA基因的部分序列，以 pUCCRNAi 与 p1301载体作为中间载 体，通过基因工程成功构建含 CaMV35S组成型启动子和抗除草剂 Bar基因的 RNA 干涉载体 p1301+COA(±)+Bar 与 p1301+COMT(±)+Bar。 2、建立玉米茎尖转化体系，将 p1301+COA(±)+Bar 干涉表达载体导入玉米 自交系郑 58中，获得了抗除草剂的含 RNA 干涉表达载体的转基因植株。 3、对 T 代 PCR 检测阳性转基因植株进行 RT-PCR 分析和秸秆进行 Klason 木 1 质素及纤维素的测定，结果显示：RNAi 降低了 ZmCoA基因的表达水平,转基因 植株 Klason木质素含量与对照相比平均降低了 22.44%，纤维素含量与对照相比 平均增加了 23.33%。 4、将转基因株系茎秆冷冻切片分别在 100×和 200×下观察，发现转基因植株 维管鞘的颜色要比野生型的浅，证明抑制内源 ZmCoA基因降低了木质素在维管 束部位的沉积，是转基因玉米中木质素含量降低的结果。 5、通过 GC-MS对木质素单体的相对含量进行测定，得到野生型植株中的 S/G 为 0.636，转基因植株中的 S/G 为 0.999，S/G 升高，即 S-木质素与 G-木质素的 含量比值增加，有利于木质素的去除。 综上所述，本文成功构建了 RNA 干涉表达载体 p1301+COA(±) +Bar 与 p1301+COMT(±)+Bar，并将 p1301+COA(±)+Bar进行玉米遗传转化，获得转 基因植株；对含干涉表达载体的转基因玉米植株进行了系统的检测，转基因玉米 中不仅降低了木质素的含量，而且改变了木质素的构成，本研究将对培育低木质 素玉米和深入了解木质素合成机制奠定基础。 关键词：玉米 RNAi CCoAOMT 木质素 纤维素 组织化学染色 III Abstract Abstract AAbbssttrraacctt The major constituent of the Maize (Zea Mays L.) stalks are lignin and cellulose. Lignin is a major cell wall polymer of vascular plants that provides mechanical strength and hydrophobicity to vascular vessels. Because of the complex structure of lignin, it is difficult to be effectively used in production. There is negative impact on forage quality, paper manufacturing, and more recently, cellulosic biofuel production. Thus there is signi