第一部分核酸化学及研究方法.docVIP

高级生化科目复习参考资料 考试说明：共两类题型 名词解释（12个，每个3分）；简答题（8个，每个8分）2014.01.09晚考 名词解释和简答题平均每部分各两个题目，但申业老师讲的核酸和生物膜部分可能会多出1-2题。 注：课程内容较多，整理起来比较繁琐，复习资料当中有些内容或许还不完全，作为复习参考吧 第一部分：核酸化学及研究方法（申业老师） 橄榄枝整理 名词解释： 基因作图(gene mapping)：在一组基因中，如果每一对基因至少与同组内的另一对基因连锁，则称这样一对基因为一个连锁群，比较一个连锁群中的不同对基因之间的重组率，可以确定基因在染色体上的排列顺序，这个过程称基因作图。 组蛋白密码( Histone Code)：组成核小体组蛋白的氨基末端游离于核小体之外，可以被共价修饰。该类修饰包括组蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化、ADP-核糖基化等过程。尤其是组蛋白乙酰化、甲基化修饰能为相关调控蛋白提供在组蛋白上的附着位点，改变染色质结构和活性。 发夹结构(Hairpins)：具回文序列的单链DNA或RNA形成的结构。回文结构( palindromic sequence)是指水平旋转180 ℃，再垂直旋转180 ℃，对称的序列结构 位点特异性重组：当λ噬菌体DNA整合到大肠杆菌染色体中时会发生位点特异性重组，重组发生在噬菌体的attP 和大肠杆菌attB序列之间，重组由一种整合酶催化。 问答题： 述端粒延长的机制 端粒是染色体末端存在特殊的序列，为简单的重复序列。端粒酶识别染色体突出的3’端序列，与端粒序列互补的一段RNA序列是端粒酶复合物的一部分。前导链的悬垂部分与端粒酶RNA杂交，以RNA为模板在端粒酶作用下延长，接着端粒酶转移到前导链的末端。引发酶和DNA聚合酶最后延长端粒DNA的滞后链 转座子类型及转座机制 转座是一个DNA片段从基因组中的一个位置转移到另外一个位置的过程 转座子：可移动的片段称转座元件或转座子 转座子两种类型： ①转座子：编码一个或两个转座必须的基因产物，同时包括10bp长的反向重复序列，位于编码序列的两端。 ②反转录转座子(retrotransposon):完成反转录需要经过RNA中间产物途径，编码反转录酶，以RNA为模板合成DNA中间产物 机制：基因八P529 核小体组蛋白有几种修饰以及与染色体活性之间的关系 组蛋白修饰的种类： ①乙酰化：赖氨酸的乙酰化 ②甲基化：赖氨酸和精氨酸的甲基化 ③磷酸化：丝氨酸的磷酸化 ④泛素化：赖氨酸的泛素化 真核生物基因组活性主要取决核小体，不仅因为核糖体定位在DNA上，还因为组蛋白精细的化学结构。组蛋白乙酰化水平增加与转录活性增强有关，而组蛋白甲基化修饰的结果则相对复杂，它可以是转录增强或转录抑制。特定组蛋白羧基端的泛素化同样影响蛋白质的降解过程，从而也可调节基因的表达。目前研究还发现组蛋白修饰与CpG岛的甲基化密切相关。 什么是转录因子，举2-3个例子说明常见转录因子的结构特征。 转录因子：结合到特异顺式作用元件上的反式作用蛋白。一般含有两个结构域：一个用来识别和结合顺式作用元件，另一与其它参与转录激活蛋白的结合。 ①碱性螺旋-转角-螺旋（basic helix–loop–helix，bHLH ）转录因子：bHLH 转录因子常形成二聚体，单体的前端有一段碱性氨基酸序列带正电荷的侧链与DNA相互作用，决定转录因子的序列特异性，两个单体的一个helix相互作用形成二聚体，另一个helix象剪刀一样插入到DNA双螺旋的大沟中。 ②碱性亮氨酸拉链（basic leucine zipper, bZIP）：形成一个类似剪刀的二聚体，结合在DNA分子的大沟上，每个单体包含30- 40个氨基酸组成的α螺旋，每隔6 个氨基酸含有一个Leu ，Leu 朝向同一方向，二聚体中Leu 相互面对，结构上将α螺旋向拉链一样拉到一起，形成二聚体，并插入到DNA大沟中。 ③锌指蛋白(zinc finger)：锌指蛋白带有2 -9 个突出部分，突出部分由一个锌离子和四个氨基酸（组氨酸和半胱氨酸），插入到DNA分子的大沟中。 通过哪几种方法可以获得cDNA的全长？简述其原理。 (1)RT-PCR（reverse transcription PCR ）：根据基因家族各成员间保守氨基酸序列设计简并引物，并用简并引物进行RT- PCR 扩增，得到该基因的部分cDNA序列，再利用RACE获得cDNA全长 (2)cDNA 末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE ）：基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA 片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3’端和5 ’端的方法。 目前己有商业化RACE技术产品推出，如CLONTECH的S