大黄鱼过氧化氢酶基因的克隆及其对鳗弧菌感染的响应.PDFVIP

第41 卷 第 5 期 水 产 学 报 Vol. 41, No. 5 2017 年 5 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA May, 2017 文章编号: 1000-0615(2017)05-0641-08 DOI: 10.11964/jfc.20160110231 大黄鱼过氧化氢酶基因的克隆及其 对鳗弧菌感染的响应 严林飞， 安 昕， 包苗苗， 何建瑜， 吴常文， 刘慧慧* (浙江海洋大学国家海洋设施养殖工程技术研究中心，浙江 舟山 316022) 摘要：为探究过氧化氢酶(catalase, CAT)对大黄鱼机体的保护作用，实验基于大黄鱼基因 组序列数据库克隆获得CAT基因1584 bp 的完整开放阅读框(GenBank 登陆号：KKF- 14425.1) ，该序列编码527个氨基酸残基，包含与其他动物高度保守的酶活性中心序列 FDRERIPERVVHAKGA 、亚铁血红素结合信号序列RLFSYPDTH 、3个催化位点残基 His75 、Asn148和Tyr358 ，以及12个NADPH 结合位点等，理论分子量为59.98 ku ，等电点 为8.37 。多序列比对显示，大黄鱼CAT氨基酸序列与其他鱼类具有较高的一致性，与同 属于石首鱼科的军曹鱼和条石鲷同源性高达94% ，在进化树中也聚类于同一进化分支， 说明该序列为CAT家族成员。实时荧光定量PCR检测显示，大黄鱼CAT基因在所检测的 7种组织(肝脏、脾脏、脑、肾、肌肉、鳃、肠) 中均有表达，但在肝脏中表达水平最高 (为肌肉中的6.68倍) 。鳗弧菌感染后，大黄鱼肝组织中CAT基因的表达随着时间的推移而 变化明显，感染后12 h，达到最高(7.48倍) ，随后逐渐下降，到72 h 已基本恢复到原始水 平，注射PBS 的对照组，CAT基因表达只略有上调，说明病原菌侵染可能引起鱼体产生 大量活性氧自由基及H O ，CAT基因则可以清除体内过量的活性氧，进而防止它们对细 2 2 胞造成损伤。 关键词: 大黄鱼；鳗弧菌；过氧化氢酶(CAT) ；基因克隆 中图分类号: Q 785 ；S 965.3 文献标志码: A 过氧化氢酶(catalase, CAT, EC )是生 化酶通过催化H O 的氧化还原反应，参与机体 2 2 物进化过程中形成的生物防御系统的关键酶之 免疫防御，清除代谢过程中产生的氧自由基和 一，广泛存在于原核和真核生物体中，其作用 过氧化物，保护细胞免受外界胁迫造成的损 机理是通过催化一对电子转移将过氧化氢(H O ) 伤，其酶活力或基因表达的变化与机体的抗氧 2 2 [ 1] [2] 分解为水和氧气，是机体抗氧化系统关键酶 。 化或健康状态密切联系 。