体外扩增高纯度的人外周血来源的NK细胞的研究论文.docVIP

　　体外扩增高纯度的人外周血来源的NK细胞的研究论文 李晓红 马健 汪菲菲 窦立萍 李猛 高春记 【摘要】 本研究探讨从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的优化技术。先用miniMACS及阴性免疫磁珠分选方法，从外周血单个核细胞（PBMNC）得到纯化的NK细胞，随后在干细胞培液基条件下，通过IL2、IL12和IL15等细胞因子的不同组合将培养体系分为IL2组、IL2+IL12组、IL2+IL15组、IL2+IL15+IL12组和对照组（不加任何细胞因子），分别培养15天，每3天半量换液并补充细胞因子；检测分选及扩增前后（CD3-CD56+）NK细胞含量、扩增倍数及扩增前后各组在不同效靶比下的杀伤率。结果显示经：miniMACS阴性免疫磁珠分选后（CD3-CD56+）NK细胞含量由分选前的11.19±5.25%提高到94.23±3.50%。培养15天后除对照组（CD3-CD56+）NK细胞纯度略下降外，其余4组与扩增前无显著性差异（P＞0.05）。在IL2、IL2+IL12、IL2+IL15、IL2+IL15+IL12培养体系中， NK细胞扩增倍数分别为15.43±1.08.freeliniMACS免疫磁珠阴性分选得少量NK细胞后，应用IL2+IL15培养条件是获得高纯度NK细胞的简单有效方法。 【关键词】 NK细胞； miniMACS； 白介素2； 白介素12； 白介素15 Ex Vivo Expansion of Highly Purified NK Cells from Human Peripheral Blood Abstract Adoptive immunotherapy using allogeneic natural killer (NK) cells provides to be useful in recipients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AlloHSCT), but its application has been limited by the inability to obtain sufficient numbers of pure NK cells. This study ed to optimize the expansion of high purity NK cells from human peripheral blood. First, the NK cells PBMNC by using miniMACS (magic cellselection) and NK Cell Isolation Kit Ⅱ. Then the isolated cells line Hematopoietic Stem Cell Expansion Medium, Sigma) supplemented an AB serum and different binations of IL2 and/or IL12, IL15 for 15 days. Cultures edia and cytokines every 3 days, and uch higher than others（P＜0.01), but no significant difference betselves (P＞0.05). And the purity of CD3-CD56+ NK cells selves (P＞0.05). It is concluded that high purity of NK cells can be efficiently expanded in culture iniMACS ; IL2,.freelia，GVL)效应，并减少移植物抗宿主病(graftversushost disease，GVHD)的发生［1-3］，故输注供者异源反应性NK细胞已经成为临床移植辅助治疗的新策略［4,5］。然而，外周血中NK细胞含量少（约占淋巴细胞的5%-7%），且目前尚缺乏有效的体外扩增体系，所以NK细胞的广泛临床应用受到了限制。目前的许多体外研究均显示IL2、IL12、IL15对促进NK细胞的分化成熟、活化、增殖及细胞毒活性有重要作用。本研究从方法学角度探索提高NK细胞纯度并采用IL2、IL12、IL15等细胞因子的不同组合，以期优化NK细胞体外扩增的效率及纯度，为NK细胞的进一步临床应用奠定基础。 材料 NK细胞分选试剂盒（NK Cell Isolation Kit Ⅱ，包括荧光标记抗体、磁珠）及miniMACS磁珠分选系统、分离柱（MS Column）均购自德国美