体外构建的HTAHSP70BCG冲激的树突状细胞疫苗的抗肿瘤作用论文.docVIP

　　体外构建的HTAHSP70BCG冲激的树突状细胞疫苗的抗肿瘤作用论文 孙光，郭连英，沈洁，刘丹丹，施广霞，钱振超 【摘要】 目的 观察体外构建的榄香烯复合瘤苗抗原卡介苗热休克蛋白70复合物（HTAHSP70BCG）诱导的树突状细胞疫苗的抗肿瘤效应。方法 来源于小鼠的肝癌HcaF榄香烯复合疫苗的抗原（HTA）与卡介苗来源的HSP70（HSP70BCG）在体外构建成HTAHSP70BCG复合物，用GMCSF和IL4诱导树突状细胞（DCs），分别用HTAHSP70BCG、HTA和HSP70BCG对其冲激。用MTT 法检测该DCs刺激的全脾细胞的增殖活性及被刺激的脾细胞的细胞毒活性。用流式细胞仪检测DCs表面CD86和CD40的表达。结果 体外构建HTAHSP70BCG可以诱导DCs成熟.freelor Effects Induced by Dendritic Cell Vaccine Pulsed or effects induced by dendritic cells (DCs) pulsed or antigen from elemenebo tumor cell vaccineheat shock protein 70 of BCG (HTAHSP70BCG).Methods Tumor antigen peptides from elemenebo HcaF cell (HTA) bined edium ulating effects on unseparated splenocytes and the cytotoxicity of the splenocytes activated eter.Results Pulsing of HTAHSP70BCG resulted in DCs maturation, characterized by upregulation of CD86 and CD40. Proliferation index of unseparated splenocytes from HTAHSP70BCG group DCs pulsed aturation and the mature DCs could activate splenocytes to generate more potent specific antitumor effect. Key or vaccine；Antitumor effects 0 引言 热休克蛋白（Heat shock proteins，HSPs）是细胞受到应激时新合成或合成增加的一组蛋白质，被称为分子伴侣，在细胞抗原的加工和提呈方面起重要作用［1］。分枝杆菌HSPs与相关抗原形成融合蛋白可诱导特异性T细胞反应，分枝杆菌HSP70富含T、B细胞表位，是细胞免疫的重要靶点，可被用来作为疫苗的载体［2］。现已证明，从肿瘤细胞来源的HSPs肿瘤肽复合物可诱导抗肿瘤免疫应答［3，4］，HSP70BCG能通过树突状细胞（Dendritic cell，DC）表面TLR4途径诱导DC成熟［5］。本实验采用榄香烯处理的HcaF肿瘤抗原（Tumor antigen of HcaF treated ene，HTA）在体外与卡介苗热休克蛋白70（HSP70BCG）构建成肿瘤疫苗HTAHSP70BCG，探讨其抗瘤效应及机制。 1 材料 1.1 实验动物与瘤株 BALB/C近交系小鼠，引自中国医学科学院北京药物研究所。HcaF肝癌细胞株由本校凌茂英教授惠赠。L929小鼠成纤维细胞瘤细胞系，由中国医学科学院肿瘤研究所张友会教授惠赠。 1.2 主要试剂 RPMI 1640（GIBCO，USA）；胎牛血清、rmIL4、rmGMCSF（Sigm）；FITC抗小鼠CD40、PE抗小鼠CD86抗体（San Diego，CA）；ADP( Trinity Biotech，Ireland)。 2 方法 2.1 HTAHSP70BCG的体外构建 按本室常规方法制备榄香烯复合瘤苗，细胞浓度调至1×108/ml，用电动匀浆器研磨制成细胞匀浆，超速离心100 000g，取上清组分作为粗制肿瘤抗原（HTA）。超声碎BCG菌，超速离心后取上清，用ADP亲和层析法［6］分离卡介苗HSP70，提取物经SDSPAGE电泳和I 1640（含20ng/ml IL4和20ng/ml GMCSF）培养液将其浓度调到1×106/ml，在37℃、5%CO2条件下培养，第3天换液，第6天收集不粘附细胞为骨髓树突状细胞 (不成熟树突状细胞),将其浓度调至1×106/ml，分别加入HSP70BCG、HTA、HTA HSP70BCG至终浓度2