体外消化透析法测定朱砂中汞生物可接受率的实验条件确定论文.docVIP

　　体外消化透析法测定朱砂中汞生物可接受率的实验条件确定论文 庞京团 胡广林 韩彬 齐江宁 李平 【摘要】 目的确定体外消化透析法测定朱砂中汞的生物可接受率的实验条件，建立实验流程，并测定朱砂中汞的生物可接受率。方法模拟胃肠消化环境，研究pH、接触时间等因素对朱砂中汞的溶出率及透析时间等对朱砂中汞的生物可接受率的影响规律，确定合适模拟条件。结果确定的实验流程模拟条件为：液/固比100，人工胃液pH=1.5，加入0.16%胃蛋白酶1 ml，接触时间100 min.freelin，加入胰液胆盐混合物量为5 ml。在确定的实验条件下，CV-AFS测得水飞朱砂中汞的溶出率为2.5×10-6（n=6，RSD＝4.1％），生物可接受率为4.8×10-7 (n=6，RSD＝3.5％)。结论体外消化透析法可用于测定朱砂中汞的生物可接受率，可为测定含朱砂中成药中汞的生物可接受率提供方法学上的参考。 【关键词】 体外消化透析法； 朱砂； 生物可接受率； 汞 Abstract：ObjectiveTo determine the simulated conditions for estimating the bioaccessibility of mercury from cinnabar by means of an in vitro digestion and dialysis.MethodsIn order to determine the appropriate simulated conditions, ulated gastrointestinal digestion environment, and studied the effects of contact time,the pH of artificial gastric juice, addition of pepsin, dialysis time, addition of pancreatin bile salt mixture.ResultsThe simulated conditions ined as follol pepsin l, contact time of 100 min, 5 ml pancreatin bile salt mixture l,dialysis time of 100 min. nO4，0.2%NH4Fe(SO4)，6 mol·ml-1 NaOH等水溶液待用。 2.1.3 人工肠液 取KH2PO46.8 g，加水500 ml溶解，用0.1 mol·L-1NaOH水溶液调节pH值至6.8。 2.1.4 胰液胆盐混合物 0.180 g胰蛋白酶、1.125 g胆盐溶于45 ml人工肠液，配制成胰蛋白酶、胆盐质量浓度分别为0.004 g·ml-1和0.025 g·ml-1的胰液胆盐混合物［7］，现配现用。 2.2 胃消化环境模拟实验 准确称取一定量朱砂加入人工胃液，搅拌呈匀浆状，加入胃蛋白酶，（37±1）℃，80 r·min-1条件下振荡，一定时间后，离心，取上清液。 2.3 肠吸收环境模拟实验 将胃消化环境实验所得样品进行酸度滴定，确定所需要NaHCO3量。将实验中确定NaHCO3水溶液量加入到透析袋中，置透析袋于胃消化实验所得样品中，（37±1）℃，80 r·min-1条件下振荡，pH值达到5.0后［9］，向样品中加入胰蛋白酶胆盐混合物，继续振荡，开始计时，一定时间后，收集透析液。 2.4 汞的测定方法 所得样品均用高压密封消解-CV-AFS测定汞含量［8］。 2.5 数据处理 测定朱砂溶出汞量以及透析汞量，参照文献中计算Zn，Fe元素生物可接受率的方法［9］，生物可接受率可由肠消化环境下测得的透析率表示。朱砂中汞溶出率以及生物可接受率公式如下： a=BA×100% b=CA×100% 公式中a、b 分别表示朱砂中汞的溶出率和生物可接受率，A、B、C分别表示朱砂中汞在朱砂中总汞量、胃模拟阶段朱砂中溶出量、朱砂中汞在肠模拟阶段透析量。 3 结果与讨论 3.1 胃消化环境模拟条件确定 体外消化透析法在模拟胃消化阶段主要考虑影响因素有液/固比、pH值、加入酶量、接触时间。本文为提出朱砂中汞安全性评价实验方法，在实验条件的选择中，我们在保证与人体环境尽可能接近的同时选择汞溶出率最高的实验条件。 在研究液/固比对朱砂中汞溶出率影响的实验中，本实验分别选用液/固比为100，200，300，400，500，600，800，1 000，测定不同液/固比下朱砂中汞溶出率［10］。以液/固比为横坐标，朱砂中汞溶出率为纵坐标，见图1。实验结果显示，液/固比在100～1 000范围内汞溶出率为（2501±91）ng·g-1，P＞0.