何首乌对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究论文.docVIP

　　何首乌对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究论文 【关键词】 何首乌；,,培养心肌细胞；,,缺氧；,,超氧化物岐化酶；,,丙二醛；,,组织化学 摘要：目的观察何首乌对培养心肌细胞缺氧性损伤的影响。方法将DA）含量明显降低（P＜0.01）。结论何首乌对缺氧心肌细胞具有良好的保护作用。 关键词：何首乌； 培养心肌细胞； 缺氧； 超氧化物岐化酶； 丙二醛； 组织化学 Experimental Study on the Protective Effects of Fleecefloechanism of Fleeceflonification cardiac muscle cells. MethodsThe cardiac muscle cells of odel to investigate the protective effects of Fleeceflonification cardiac muscle cells by means of biochemical testing, histochemistry and so on.ResultsIn the normal group,.freeluscle cells and the activity of SDH increased al group, the activity of SOD odel control group and the content of MDA increased significantly(P 0.01).ConclusionThe results prove that Fleeceflouscle cell； Anoxia； SOD； MDA； Histochemistry 何首乌又称首乌、赤首乌，是蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，其化学成分主要有卵磷脂、羟基蒽醌类化合物（主要为大黄素、大黄酚、大黄酸等葡萄糖苷）、二苯乙烯苷类及微量元素钙、铁、锌、锰、铜等［1］。何首乌具有补肝、益肾、养血、祛风的作用，主治肝肾阴亏、发须早白、血虚头晕、腰膝软弱、筋骨酸痛、遗精崩带、久疟、久痢、慢性肝炎、痛肿等病症［2］。 何首乌对在体缺血再灌注心肌细胞具有保护作用［3］，但其对体外缺氧培养心肌细胞等方面的研究.freell浸泡1 h。100℃煮沸2 h，过滤。再加蒸馏水2 000 ml煮沸1 h，过滤。将两次过滤液在80℃水浴下浓缩成浸膏，在70℃温箱中烘干、粉碎，备用。 1.3 试剂 人参总皂苷由延边大学天然植物制品研究所提供；RPMI Medium1640培养基为GIBCO公司产品；胰蛋白酶为DIFCO公司产品；新生灭活小牛血清为北京华美生物工程公司产品；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒和丙二醛（MDA）试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。 1.4 仪器超净工作台为上海净化设备厂产品；USA二氧化碳培养箱；日本OLYMPUS 倒置相差显微镜；德国ZK15型超低温离心机；芬兰MK3型酶标仪；CSS200型超声波粉碎机为山东济宁无线电仪器厂产品。 1.5 方法 1.5.1 心肌细胞的原代单层培养 心肌细胞的培养采用姜玉顺等［4］建立的原代单层培养方法。 1.5.2 培养心肌细胞缺氧损伤模型的制备 将生长良好的培养心肌细胞的培养基倒掉，以预先饱和纯氮气（99.99%）40 min的N2饱和缺氧培养基冲洗2次，取N2饱和缺氧培养基3 ml加入培养瓶中，同时向瓶内充氮气10 s以置换瓶内空气，置于37℃二氧化碳培养箱中，12 h后备用。 1.5.3 分组及处理取生长良好的培养瓶36瓶随机分为4组：正常组、模型组、对照组及实验组。正常组更换正常培养基培养；模型组更换N2饱和缺氧培养基培养；对照组为N2饱和缺氧培养基加0.5 mg/ml人参皂苷共培养；实验组为N2饱和缺氧培养基加5 mg/ml何首乌提取物共培养。将各组均置于37℃二氧化碳培养箱内培养12 h。 1.5.4 生化检测实验各组各取6瓶测定SOD活性和MDA含量。采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，采用TBA法测定MDA含量， SOD活性和MDA含量的测定严格按照试剂盒操作程序进行。 1.5.5 组织化学观察实验各组各取3瓶做组织化学染色。取出各组培养瓶内的生长细胞盖玻片，进行PAS反应显示糖原，用酶组织化学方法显示SDH及ACP。经上述染色后用OLYMPUS万能显微镜观察并拍片分析。 1.5.6 数据处理 各组数据均采用SPSS11.0统计软件进行方差分析。 2 结果 2.1 生化检测结果 2.1.1 何首乌对缺氧培养心肌细胞SOD活性的影响实验组及对照组心肌细胞SOD活性明显高于模型组（P＜0.01），说明何首乌能