关于肿瘤敏感基因TSG101的分子生物学研究进展论文.docVIP

　　关于肿瘤敏感基因TSG101的分子生物学研究进展论文 .freelhomozygousknockout，rHKO）［用转录激活启动子的反义rNA随机地引入基因组转录的基因中以剔除与启动子插入部位相邻近的等位基因］在nTH3T3成纤维细胞中发现一个新基因（1）。该基因的功能失活可引起细胞转化；将该转化细胞注射在裸鼠皮下，可形成肿瘤并伴有转移；将该基因功能恢复，转化的细胞又可部分逆转。该基因被命名为tSG101（tu-mor-Susceptibilitygene101）。 随后，他们又克隆到人的tSG101基因（2），并进行了该基因在染色体上的定位。之后，人们对tSG101基因进行了一系列研究.freelosomaltransferableDNAfrag-ment）更靠近着丝粒，并且较d11S860遗传标记更近着丝粒6Mb以上（4）。 已知在多种类型的人类恶性肿瘤如乳腺癌，氏瘤，肺癌，膀胱癌，睾丸癌，肾上腺皮质瘤，肝胚细胞瘤，卵巢癌中，染色体11p15区带或其邻近的区域经常发生杂合性丢失（lossofheterozygosity）。此外，研究发现：将正常的11号染色体或其片段导入乳腺癌细胞，可以逆转癌细胞的转移倾向以及其他的一些恶性特征，提示在11号染色体的长臂上可能含有一个肿瘤抑制基因，其突变参与人类肿瘤，尤其是乳腺癌的发生。小鼠的hTSG101同源基因tsg101的功能失活可使nTH3T3成纤维细胞转化为具有转移性的癌细胞，提示hTSG101基因是否就是这种可抑制肿瘤发生的基因。 ①本文受国家自然科学基金（编号资助 li等（2）对15例乳腺癌的cDNA进行分析，发现其中7例的tSG101cDNA存在序列缺失。这7例中有6例的基因dNA存在较大的片段缺失，缺失片段的大小范围在7．4－16．4kb左右。此外，在1例乳腺癌的tSG101基因dNA中，在其编码卷曲螺旋结构域（coiled-coil）的片段上，还存在一个i→c的点突变。 但steiner等（3）通过对46例乳腺癌组织和13个乳腺癌细胞系的dNA直接进行分析，发现tSG101基因dNA中并不存在上述大片段缺失。此外，zhong等（5）也在10种乳腺癌细胞系中找到了完整的tSG101蛋白质，亦表明其编码基因是正常的。lee等（4）在研究中发现：（1）对72例乳腺癌进行基因组southernBlot分析，未发现tSG101基因有基因内缺失。（2）对12例没有基因内缺失的乳腺癌的cDNA进行分析，发现其中的5例除了有全长的tSG101cDNA外，还有几种截短的cDNA片段。这些cDNA片段缺失的类型共归为6类（a，b，c，d，e，f型），其中以a型最为普遍。还发现这些缺失的cDNA片段具有较一致的剪接供体序列和剪接受体序列。（3）在4例配对的正常乳腺组织中，有3例存在d型的转录子；在2个胎儿的各种组织（心，胃肠道，肺，舌，皮肤，肾，脑）中，也发现了a，b，d型的转录子。不过正常乳腺组织和胎儿组织中，这些截短的转录子的数量比乳腺癌中的相对更低许多。这些情况提示：并非是基因内的缺失，而是mRNA的异常剪接造成了乳腺癌中hTSG101基因转录子片段缺失。gayther等（6）对一些恶性肿瘤，eB病毒无限增殖化b细胞和正常肺间质组织的dNA，rNA进行分析，也得到了相似的结果：在各种样本中，都存在不少的tSG101转录子片段缺失的情况，片段缺失的断裂点也是与一些隐蔽的剪接位点相一致的；而这些样本的dNA分析却难以找到与这些转录子缺失相对应的改变。sun等（7）在4例前列腺癌中发现有6种不同的转录子片段缺失情况，其中最普遍的一种缺失与lee等所发现的最普遍的缺失类型－a型（bp153－1055）是一致的。 由此可以认为：hTSG101基因在肿瘤发生中并没有发生改变，而是其转录子的剪接出现了异常，全长转录子减少，使其表达减少。 2 hTSG101蛋白质 hTSG101基因编码的h－tSG101蛋白，含有380个氨基酸，分子量42．84kDa。 h－tSG101蛋白与小鼠tSG101有94％的同源性。两者之间只存在20个不相一致的氨基酸和一个间隙。一个卷曲螺旋结构域（h－tSG101氨基酸231－301）和一个富含脯氨酸的区域（h－tSG101氨基酸130－20532％脯氨酸）在h－tSG101与小鼠tSG101两者间是高度保守的，分别只有1个氨基酸和3个氨基酸不一致。卷曲螺旋结构域中的亮氨酸接链元件在两种蛋白质间是相同的。在小鼠tSG101与h－tSG101两者间一致的位点还有7个假定蛋白激酶c磷酸化位点（氨基酸11，38，86，89，215，357）；5个可能的酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点（氨基酸38，210，249，265，290）