细胞迁移划痕实验1.docVIP

细胞迁移实验技术 一、基本原理 细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上， 用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间（例如72h），取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。 二、操作步骤 1．先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2．在加入约5105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，为过夜。 3．第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。 4．PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。 5．放入375% CO2培养箱，培养。按0，6，12，24取样，拍照。 三、注意事项： 在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。 一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（2%）否则细胞增殖就不能忽略。 按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，解决了前后观察时位置不