BALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族nave T细胞分析论文.docVIP

　　BALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族nave T细胞分析论文 【摘要】 目的 了解B细胞急性淋巴细胞白血病（BALL）患者外周血T细胞中TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环（sjTRECs）的存在情况，从而了解胸腺近期输出各TCR Vβ亚家族 nave T细胞的功能。方法 利用半巢式PCR分别扩增10例BALL患者外周血单个核细胞DNA中的23种Vβ～Dβ1 sjTRECs，10例正常人作为对照。结果 TCR Vβ亚家族sjTRECs在大部分正常人和部分BALL患者中均可检测到，与正常人比较，BALL病人的Vβ24～Dβ1 sjTRECs出现频率比正常人高，且有统计学意义（80%∶30%, P=0.0285），另有18个家族的Vβ～Dβ1 sjTRECs比正常人低，其中在Vβ1（30%, P=0.0285）、Vβ12（20%,P=0.0285）、Vβ13（40%, P=0.0043）、Vβ15（20%, P=0.0022）和Vβ18（20%, P=0.0089）5个亚家族sjTRECs出现频率的差异有统计学意义。结论 BALL病人胸腺输出大多数Vβ亚家族nave T细胞功能低于正常人。 【关键词】 急性淋巴细胞白血病 T细胞受体删除DNA环 胸腺近期输出功能 0 引言 白血病患者常伴有细胞免疫功能缺陷.freelol/L引物、1 mmol/L dNTP、2 u Taq 聚合酶（Promega）、10×Buffer缓冲液和1.5 mmol/L MgCl2。反应在PCR扩增仪（BioMetra）中进行。在94℃、3 min预变性后，首次及半巢式PCR均进行30个循环，每一循环包括：94℃ 1 min，65℃（第二次PCR为70℃）1.5 min 和72℃ 1.5 min（末次6 min），PCR产物保存于4℃中备用。PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶（溴乙锭染色）中电泳分析结果7。 1.4 统计学处理 两组样本中23个TCR Vβ亚家族sjTRECs检测情况用检出率来表示，显著性检验用四格表的Fisher确切概率法检验。 2 结果 各亚家族TCR Vβ～Dβ1 sjTRECs在大部分正常人及部分BALL患者外周血T细胞DNA中均可检测到，见图1，两组检出率结果见图2。10例正常人的Vβ～Dβ1 sjTRECs检出率多数较高，其中Vβ10、Vβ13和Vβ14的sjTRECs检出率为100%，Vβ3、Vβ5、Vβ15和Vβ22的sjTRECs检出率为90%。而10例患者的Vβ～Dβ1sjTRECs 中23个亚家族中有13个亚家族低于50%，Vβ24亚家族检出率最高为80%。与正常人比较显示：10例患者中1个家族（Vβ24）sjTRECs出现频率比正常人高且有统计学意义（P=0.0285），1个家族（Vβ11）sjTRECs出现频率比正常人高但无统计学意义（P=0.6477），3个家族（Vβ2、Vβ6 、Vβ19）sjTRECs出现频率与正常人相同，其余18个家族比正常人低，其中在Vβ1（30%, P=0.0285）、Vβ12（20%, P=0.0285）、Vβ13（40%, P=0.0043）、Vβ15（20%, P=0.0022）和Vβ18（20%,.freelic function ent of HIV infection/J/．Nature，1998，396(6712)：690695． /2/ Leodified allogeneic hematopoietic stem cell transplantations/J/．Blood，2002，100(6)：22352242． /3/ Talvensaari K，Clave E，Douay C，et al．A broad Tcell repertoire diversity and an efficient thymic function indicate a favorable longterm immune reconstitution after cord blood stem cell transplantation/J/．Blood，2002，99(4)：14581464． /4/ 李扬秋，杨力建，陈少华，等．AMLM5患者外周血naive T细胞水平和TCRVβ谱系利用特点/J/．现代临床医学生物工程学杂志，2004，10(4)：283286． /5/ 耿素霞，李扬秋，杨力建，等．实时定量PCR分析CML患者胸腺近期输出功能/J/．肿瘤防治研究，2004，31(6)：317319． /6/ Poulin JF，Visic function in Adult humans/J/．J Exp Med，1