HMGB1对肝星状细胞细胞外基质合成的影响论文.docVIP

　　HMGB1对肝星状细胞细胞外基质合成的影响论文 韩红莉 杨柳絮 吴红样 赵中夫 【摘要】 目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对肝星状细胞(hepatic stellate cell HSC)合成细胞外基质(extracellular matrix ECM)的影响。方法：剂量效应组分别用含HMGB1 0 mg/L,0.1 mg/L,1.0 mg/L,10 mg/L，20 mg/L和40 mg/L的HMGB1培养液培养HSC-T6 6 h；时间效应组以含有10 mg/L HMGB1的培养液培养0 h、6 h、12 h、18 h和24 h,对照组以不含HMGB1的培养液分别培养HSC-T6细胞，留取各组培养液离心后的上清，用双抗体夹心ELISA方法检测其上清中PⅢP和CⅣ的含量。结果：对照组HSC-T6细胞ECM分泌量较低；HSC-T6的ECM分泌量与HMGB1呈剂量依赖关系(r=0.835,0.955，P 0.05)；10 mg/L HMGB1时间效应组的PⅢP,CⅣ分泌量在18 h和24 h 均明显高于对照组（P 0.05）。结论：HMGB1能诱导HSC-T6细胞分泌ECM，可能在肝纤维化的发生、发展中发挥重要作用。 【关键词】 HMGB1；HSC-T6；细胞外基质；肝纤维化 Abstract Objective:To investigate the effect of Human high mobility group box1 protein(HMGB1)on the extracellular matrix secretion of rat hepatic stellate cell and explore the function of HMGB1 in the occurrence and development of hepatic fibrosis.Methods:The effects of various doses of HMGB1 on the ECM secretion of the HSC-T6 cells:Cells g/L,0.1 mg/L,1.0 mg/L,10 mg/L,20 mg/L,40 mg/L),each group cells ulated by different concentrations of HMGB1 for 6h;The relationship stimulated time of HMGB1 and secretion of ECM in HSC-T6 cells:cells ulated groups (0 h,.freelg/L).The PⅢP and CⅣ of culture supernatant ethod.Results:The secretion of ECM in the control groups ulated groups. And it e ulated groups g/L-10 mg/L scope(r=0.835,0.955，P 0.05).Conclusion:The secretion of ECM in HSC-T6 cell portant role in the development of hepatic fibrosis. Key L,细胞贴壁后改用2%的胎牛血清的DMEM培养液同步饥饿培养2 h,使培养细胞处于G0期后做下面实验： 1.2.1. HMGB1的剂量效应组：分别用含有0 mg/L、0.1 mg/L、1.0 mg/L、10 mg/L 、20 mg/L和40 mg/L的HMGB1培养液培养HSC-T6，6 h后,收集HMGB1刺激孔及对照孔培养上清液，用双抗体夹心ELISA法测HSC-T6培养上清液中PⅢP，CⅣ的含量。以上每组均设3个复孔，具体操作严格按照试剂盒说明进行。 1.2.2. HMGB1的时间效应组：刺激组（10 mg/L HMGB1）和正常对照组（等量的PBS）分别用含10 mg/L HMGB1和等量的PBS的DMEM培养液培养HSC-T6细胞0 h、6 h、12 h、18 h和24 h,同上收集培养上清液 用双抗体夹心ELISA 方法测HSC-T6培养上清液中PⅢP ，CⅣ的含量。以上每组均设3个复孔，具体操作严格按照试剂盒说明进行。 1.3 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件，进行Spearman相关分析，单因素ANOVA(方差分析)，两样本比较采用LSD-t检验，实验数据均以(x±s)表示,P＜0.05判定有显著性差异。 2 结果 2.1. HMGB1对 HSC-T6分泌PⅢP、CⅣ的剂量效应 HMGB1能促进HSC-T6分泌PⅢP、CⅣ，在一定浓度